本文關(guān)鍵詞：巴貝蟲LAMP檢測(cè)方法的建立及廣西食蟹猴人體血液寄生原蟲的感染調(diào)查

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【摘要】：巴貝蟲病是巴貝蟲在紅細(xì)胞內(nèi)寄生引起的人畜共患病,主要通過蜱蟲叮咬傳播,也通過血液交換傳播。在全球范圍內(nèi),巴貝蟲病是一種重要的新發(fā)傳染病,且近年來國(guó)內(nèi)外報(bào)道的病例數(shù)呈上升趨勢(shì)。感染人體的巴貝蟲主要有田鼠巴貝蟲(B. microti),分歧巴貝蟲(B. divergens)、鄧肯巴貝蟲(B. duncani),也有吉氏巴貝蟲(B. gibsoni)及牛巴貝蟲(B. bovis)感染人的報(bào)道,其臨床表現(xiàn)多樣,感染者可無(wú)任何臨床癥狀,少數(shù)患者可表現(xiàn)為重癥,主要癥狀包括高熱、溶血性貧血和黃疸,腎功能障礙、充血性心力衰竭和急性呼吸窘迫綜合征,甚至死亡,常發(fā)生在免疫力低下人群中。常規(guī)抗生素和抗寄生藥物不能有效殺滅巴貝蟲。因此,為了減少巴貝蟲傳播的風(fēng)險(xiǎn),應(yīng)當(dāng)加強(qiáng)對(duì)該蟲的流行病學(xué)調(diào)查。目前臨床上尚缺乏對(duì)疑似感染者的檢測(cè)及快速診斷方法。目前形態(tài)學(xué)方法仍是臨床檢驗(yàn)主要的診斷方法,免疫學(xué)方法劣勢(shì)在于需要宿主血清中出現(xiàn)針對(duì)原蟲的特異性抗體,而動(dòng)物感染后產(chǎn)生抗體需要幾天乃至幾周時(shí)間,并且感染消失后,抗體還能持續(xù)存在數(shù)月,因此免疫學(xué)檢查應(yīng)用于急性感染、免疫動(dòng)物或者治療后動(dòng)物時(shí)作用有限。在過去數(shù)年中已經(jīng)有多種在宿主和媒介體內(nèi)檢測(cè)巴貝蟲的分子生物學(xué)方法。近年來經(jīng)過不斷地改進(jìn),LAMP方法被廣泛應(yīng)用于多種病原體感染的檢測(cè)。本研究基于田鼠巴貝蟲(B. microti)、鄧肯巴貝蟲(B. duncani)、分歧巴貝蟲(8.divergens)、牛巴貝蟲(B. bovis)以及吉氏巴貝蟲(B. gibsoni) 18SrRNA基因的保守序列,設(shè)計(jì)了田鼠巴貝蟲種特異性引物及巴貝蟲屬特異性LAMP引物,建立了可檢測(cè)感染人的巴貝蟲屬的LAMP方法,檢測(cè)靈敏度分別達(dá)到3×102/μl20/μl的基因拷貝數(shù)。采用該方法對(duì)5種可感染人體的巴貝蟲以及可感染人體的惡性瘧原蟲和棘阿米巴進(jìn)行特異性檢測(cè),兩種方法均未出現(xiàn)交叉反應(yīng),特異性好。LAMP方法增加了檢測(cè)特異性、降低儀器使用要求、加快檢測(cè)效率以及降低檢測(cè)成本,在基層及調(diào)查現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)用的快速檢測(cè)方面,有很大的應(yīng)用前景。人體血液寄生原蟲病仍是人類的健康威脅,.其中,瘧疾和人巴貝蟲病等在我國(guó)均有不同程度的流行。瘧原蟲是一種重要的血液寄生原蟲,近年來一些猴瘧原蟲感染人體的病例不斷被發(fā)現(xiàn)。目前,諾氏瘧原蟲(Plasmodium knowlesi),已被看做第五種感染人類的瘧原蟲。東南亞的食蟹猴瘧原蟲(P. cynomolgi)以及南美的巴西瘧原蟲(P. brasilianum)和吼猴瘧原蟲(P.simium)也可以通過按蚊傳播感染人類。巴貝蟲病作為一種重要的全球新發(fā)傳染病,有人獸共患的特點(diǎn),并且有報(bào)道在進(jìn)口的廣西養(yǎng)殖獼猴血液中檢測(cè)出田鼠巴貝蟲,提示廣西存在巴貝蟲等血液原蟲動(dòng)物源性傳播的可能性大。廣西氣候濕潤(rùn),傳播血液寄生原蟲的動(dòng)物媒介的種類、數(shù)量多,活動(dòng)頻繁,而野生動(dòng)物有可能作為血液寄生原蟲的儲(chǔ)存宿主。為了防控人體血液寄生原蟲的提供基礎(chǔ)資料和科學(xué)依據(jù),本研究對(duì)廣西某養(yǎng)殖場(chǎng)食蟹猴進(jìn)行了相關(guān)研究。2012年采集廣西南寧某食蟹猴養(yǎng)殖場(chǎng)猴血液樣本993份,全部制作FTA卡(Flinders Technology Associates Filter Paper)樣本,同時(shí)涂制薄血膜550份。將樣本混合,以巢式PCR及PCR方法分別檢測(cè)FTA卡保存的猴血樣本中巴貝蟲以及瘧原蟲。檢測(cè)陽(yáng)性組再分別單個(gè)樣本檢測(cè),陽(yáng)性樣本對(duì)應(yīng)的薄血膜進(jìn)行姬姆薩染色后再鏡檢。經(jīng)巢式PCR方法檢測(cè),田鼠巴貝蟲(B. microti)檢出陽(yáng)性率為6.95%(69/993)；僅1例經(jīng)PCR檢出豬尾猴瘧原蟲(P. inui)陽(yáng)性。22份PCR檢測(cè)巴貝蟲陽(yáng)性的血液樣本經(jīng)染色鏡檢, 共16份檢出巴貝蟲,其顯微鏡下觀察到紅細(xì)胞內(nèi)有環(huán)狀體,無(wú)瘧色素。研究結(jié)果表明,我國(guó)廣西食蟹猴的田鼠巴貝蟲感染率較高,其可能在人巴貝蟲病傳播中起儲(chǔ)存宿主的作用。在篩查田鼠巴貝蟲低密度感染時(shí),巢式PCR方法敏感性明顯高于顯微鏡鏡檢法,且與混合樣本方法協(xié)同使用,大大節(jié)省人力、財(cái)力,是流行病學(xué)調(diào)查的經(jīng)濟(jì)有效的手段。
【關(guān)鍵詞】：巴貝蟲 LAMP 食蟹猴 瘧原蟲 巢式PCR
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R531;R446.6
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 英文縮略詞表10-11
• 第一部分 巴貝蟲LAMP檢測(cè)方法的建立11-37
• 引言11-12
• 材料和方法12-18
• 結(jié)果18-33
• 討論33-35
• 結(jié)論35-37
• 第二部分 廣西食蟹猴人體血液寄生原蟲的感染調(diào)查37-52
• 引言37
• 材料和方法37-40
• 結(jié)果40-49
• 討論49-51
• 結(jié)論51-52
• 參考文獻(xiàn)52-57
• 綜述57-68
• 參考文獻(xiàn)64-68
• 附錄68-69
• 致謝69

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

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本文編號(hào)：615088