本文是一篇專業(yè)的醫(yī)學論文，主要是NF-κB信號通路的影響及其臨床意義進行闡述，詳情請看下面的介紹。

　　本研究基于中醫(yī)學理論及筆者的臨床經(jīng)驗，結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學研究進展，通過制備內(nèi)毒素型急性肺損傷兔模型，觀察中藥制劑血必凈注射液對ALI肺組織NF-κB的活性變化，探討血必凈注射液是否通過拮抗內(nèi)毒素、抑制炎性介質(zhì)釋放和保護內(nèi)皮功能等機制而發(fā)揮治療作用，為中西醫(yī)結(jié)合方法治療ALI提供理論依據(jù)，提高搶救成功率。

　　1 材料與方法

　　1.1 材料

　　脂多糖、內(nèi)毒素脂多糖（LPS）及試劑盒購自廣州晶美生物技術有限公司（代理美國Sigma公司產(chǎn)品）。NF-κB的同源結(jié)合序列由北京奧科生物技術公司合成并行末端生物素標記。血必凈注射液由天津紅日藥業(yè)股份有限公司提供，批準文號：Z20040033，每支10 mL。有效成分是由中藥原料藥紅花、赤芍、川芎、丹參、當歸中提取，其提取物的有效成分包括紅花黃色素A、川芎嗪、丹參素、阿魏酸、芍藥苷、原兒茶醛等。其中紅花黃色素A濃度>0.5 mg/mL，芍藥苷濃度>1.0 mg/mL，阿魏酸濃度>0.01 mg/mL。

　　1.2 動物模型及分組

　　1.2.1 分組 取新西蘭兔80只（雄性），體重2.0～2.5 kg，按隨機方法分為四組：空白對照組、單純急性肺損傷（LPS）組、單純血必凈（XBJ）組、血必凈治療（LPS+XBJ）組，各20只。

　　1.2.2 動物模型制作 1%戊巴比妥鈉40 mg/kg腹腔麻醉，經(jīng)耳緣靜脈注入內(nèi)毒素LPS，制成急性肺損傷的動物模型。

　　1.2.3 干預方法 空白對照組給予生理鹽水10 mL注射，LPS組僅注射LPS 5 mg/kg，XBJ組僅注射血必凈5 mL/kg，LPS+XBJ組注射LPS 5 mg/kg+血必凈5 mL/kg靜脈注射。

　　1.3 觀察指標及標準

　　1.3.1 血流動力學變化 通過生物多導儀觀察實驗前后血流動力學變化，包括呼吸頻率、心率、體溫、動脈和靜脈氧分壓、體重等，在所需觀察時間內(nèi)抽取血液標本。

　　1.3.2 動物模型制作成功的病理指標 LPS致傷后半小時處死動物，肺臟體積增大，表面可見大小不等的暗紅色斑片狀病灶，切面可有淡紅或白色泡沫樣液體溢出；光鏡下觀察，肺組織內(nèi)有白細胞浸潤，可見肺間質(zhì)及肺泡水腫，肺出血明顯。肺組織濕/干（W/D）比值明顯升高。

　　1.3.3 肺組織病理形態(tài)變化 于12、24、36、48 h分批處死后分離肺組織后，取右肺組織進行組織切片在光鏡、電鏡觀察病理形態(tài)變化。

　　1.3.4 NF-κB活性測定 分離左肺組織，采用4℃生理鹽水進行左肺灌洗，收集灌洗液，取搖勻的灌洗液原液1滴，作細胞總數(shù)計數(shù)。灌洗液離心，細胞沉渣涂片做Wrigh-Giemsa染色，筆耕文化傳播，鏡下分類，計數(shù)巨噬細胞、中性粒細胞（PMN），采用凝膠電泳遷延率法（EMSA）加計算機輔助圖像分析技術檢測白細胞NF-κB活性（按試劑盒說明操作）。

　　1.4 統(tǒng)計學方法

　　使用SPSS 12.0統(tǒng)計軟件進行分析，計量資料采用均數(shù)±標準差（x±s）表示，重復測量的計量資料采用方差分析，樣本均數(shù)之間的兩兩比較用q檢驗。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

　　2 結(jié)果

　　與空白對照組比較，LPS組各時間點肺組織NF-κB表達量均明顯增高（P < 0.01）；與LPS組相同時間點比較，LPS+XBJ組24、36、48 h肺組織NF-κB表達量明顯減少（P < 0.01）；與空白對照組比較，XBJ組各時間點肺組織NF-κB表達量有一定減少，但差異無統(tǒng)計學意義（P > 0.05）。見表1。

　　3 討論

　　既往臨床報道顯示，接近半數(shù)的膿毒癥患者發(fā)生ALI，進而發(fā)展成為急性呼吸窘迫綜合征（ARDS），后者為膿毒癥患者的主要死因之一。ALI發(fā)生時，肺組織中炎性因子大量表達，參與ARDS的發(fā)生發(fā)展。NF-κB是一組可被數(shù)百種上游因子激活的多效因子，其通過多條信號通路參與復雜的炎癥反應。既往研究顯示，NF-κB是膿毒癥炎癥反應的樞紐環(huán)節(jié)，其上游因子包括TLRs、TNF-α、COX-2等，由于單純下調(diào)某一上游因子并不能從根本上阻止ALI的進展，因此本研究選取NF-κB作為研究對象。

　　張克君等[2]向大鼠胰膽管逆行注入5%�；悄懰徕c誘導ALI模型，結(jié)果發(fā)現(xiàn)肺組織NF-κB在6 h后開始增加，24 h增加最明顯，而給予NF-κB抑制劑二硫代氨基甲酸吡咯烷（PDTC）的干預組，各時間點相應肺組織NF-κB含量明顯降低，且NF-κB的下游因子PUMA表達水平亦明顯降低，肺泡Ⅱ型細胞上皮凋亡明顯較模型組輕。故他們認為NF-κB活化進而上調(diào)下游因子PUMA表達，促進肺泡Ⅱ型上皮細胞凋亡，而在ALI過程中發(fā)揮重要作用。本實驗的結(jié)果顯示，兔在注射LPS誘導ALI后，病程早中期NF-κB大量表達，至36 h達到峰值，隨后逐漸平穩(wěn)并出現(xiàn)降低趨勢，提示在ALI的早中期，促炎反應占優(yōu)勢，而后期則轉(zhuǎn)為抗炎反應占優(yōu)勢。由于ALI發(fā)展成為ARDS的根本原因在于內(nèi)毒素可造成大量炎性介質(zhì)釋放，產(chǎn)生“瀑布”效應，促抗炎平衡隨之被破壞。而NF-κB是ALI中發(fā)揮重要角色的因子，其在多條炎性通路中占據(jù)上游位置，阻斷NF-κB的活化，就可能抑制肺組織細胞的凋亡過程，延緩ALI的發(fā)展。血必凈是由丹參、當歸、赤芍、川芎、紅花五味中藥經(jīng)現(xiàn)代制藥工藝提取其有效成分制成，主要成分為丹參素、芍藥苷、阿魏酸、紅花黃色素、川芎嗪等，既往動物實驗及臨床資料均顯示血必凈具有降低MODS死亡率的作用[3-6]。本次研究結(jié)果顯示，血必凈顯著抑制了ALI兔模型的NF-κB表達，從而減輕了ALI，而未注射內(nèi)毒素的XBJ組并未表現(xiàn)出NF-κB表達的明顯抑制，提示血必凈可能通過對內(nèi)毒素的抑制作用阻斷NF-κB的活化過程，而對正常機體的NF-κB信號通路無明顯影響。

　　綜上所述，血必凈可通過下調(diào)ALI肺組織中NF-κB的表達水平，阻斷其介導的炎癥反應通路，抑制肺組織細胞的凋亡過程，而對正常肺組織中的NF-κB表達并無明顯影響，具有顯著的臨床應用價值。血必凈的具體作用機制及其是否對內(nèi)毒素產(chǎn)生直接的抑制作用，尚需要進一步的實驗研究證實。

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