本文關(guān)鍵詞：人體指甲中尿酸定量方法的建立及硫代脯氨酸結(jié)構(gòu)同位素標記新型質(zhì)譜衍生化試劑的開發(fā)

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【摘要】：尿酸是生物體內(nèi)一種內(nèi)源性抗氧化劑,主要由食物中的嘌呤分解和細胞代謝分解的核酸而來。近年來,高尿酸血癥和痛風(fēng)的患病率持續(xù)增加。而痛風(fēng)因在早期階段沒有明顯癥狀,所以并不能早期發(fā)現(xiàn)。而且人體血尿酸水平的增高會導(dǎo)致心血管及其他代謝性疾病。因此迫切需要開發(fā)一種簡便,廉價,高靈敏的早期診斷方法。非侵襲性指甲樣本相對于血液,尿液等生物樣本,具有采集方便,無感染危險,易于儲存等優(yōu)點,目前尚未有將其應(yīng)用于痛風(fēng)診斷的文獻報道。本研究中使用高效液相(HPLC)-紫外檢測器(UV)首次建立了對人體指甲中尿酸的定量分析方法。利用日立HPLC系統(tǒng),GL Sciences公司的ODS-3色譜柱(250mm×4.6 mm I.D.,4.0 μm),流動相為磷酸鹽緩沖液(74mmol/L, pH2.2):甲醇=98：2,流速1.0 mL/min,在284 nm處進行紫外檢測,分析時間為10分鐘。在1.0-10000 ng范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r2≥0.9999)；最低檢測限(S/N=3)為2.0 pg;日內(nèi)、日間精密度范圍為1.68%-8.02%：平均加樣回收率為103.40%。對10名健康志愿者(5男5女)10個手指中尿酸含量進行了比較。結(jié)果表明男性10個手指中尿酸含量普遍高于女性,男性和女性大拇指及小拇指中尿酸含量變動較大,然而食指、中指及無名指三個手指中尿酸含量相對穩(wěn)定,所以在以后的研究中采用上述三個手指的指甲為尿酸定量分析的樣本。在此,我們?yōu)榱诉M一步驗證指甲在痛風(fēng)診斷中的有效性,對26名健康志愿者(22-60歲)及22名痛風(fēng)患者(26-65歲)的手指甲中尿酸含量進行了比較,得出健康志愿者手指甲中尿酸定量范圍為44.57±9.37 ng/mg,而痛風(fēng)患者尿酸定量范圍為144.7±47.93 ng/mg。痛風(fēng)患者組指甲中尿酸含量明顯高于健康志愿者組。具有顯著性差異(p0.01),因此人體指甲中尿酸定量分析檢測為痛風(fēng)診斷提供了一種新的非侵襲方法。手性是內(nèi)源性代謝物的一個重要特征,然而現(xiàn)代代謝組學(xué)研究的主流LC-MS聯(lián)用技術(shù),也無法鑒別手性代謝物。但柱前衍生化方法可以解決手性代謝物分離問題,所以我們以帶手性中心的硫代脯氨酸為母體與帶同位素標記苯甲酰氯進行反應(yīng),合成了具有靶向氨基官能團手性代謝物同位素標記質(zhì)譜手性試劑。并應(yīng)用于手性代謝物1-苯乙胺(R, S-PEA)、1-(1-萘基)乙胺(R, S-NEA)的分析,R, S-PEA分離度(Rs)為1.90, R, S-NEA分離度(Rs)為2.21,達到完全分離,分離效能良好。在質(zhì)譜檢測中,最佳轟擊能量為40 eV時,獲得高強度的特征碎片離子m/z為77。本試劑可提高手性代謝物在質(zhì)譜中的靈敏度,還可以利用同位素在質(zhì)譜中離子化效率相同且m/z比不同的特點篩選各種疾病的生物標志物。本方法將為手性代謝組學(xué)分析及手性生物標志物的篩選提供新的分析手段。
【關(guān)鍵詞】：人體指甲 尿酸 痛風(fēng) HPLC-UV 硫代脯氨酸 質(zhì)譜手性試劑
【學(xué)位授予單位】：延邊大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R446.1
【目錄】：

• 摘要6-7
• Abstract7-11
• 前言11-13
• 第一章 人體指甲中尿酸定量分析方法的建立與評價13-16
• 1.1 實驗部分13-14
• 1.1.1 主要儀器與試劑13
• 1.1.2 HPLC流動相的制備13
• 1.1.3 HPLC色譜條件13
• 1.1.4 尿酸標準品溶液的制備13-14
• 1.1.5 人體指甲的采集與前處理14
• 1.2 結(jié)果與討論14-16
• 1.2.1 HPLC色譜條件的優(yōu)化14
• 1.2.2 線性范圍和檢測限14-15
• 1.2.3 精密度和穩(wěn)定性15-16
• 第二章 健康人與痛風(fēng)患者指甲中尿酸含量的定量分析16-29
• 2.1 實驗部分16-18
• 2.1.1 主要儀器與試劑16-17
• 2.1.2 人體指甲收集方案制定17
• 2.1.3 實際采集的受試者相關(guān)信息17
• 2.1.4 HPLC色譜條件17
• 2.1.5 人體指甲中UA萃取條件17-18
• 2.1.6 人體指甲中UA的質(zhì)譜分析18
• 2.1.7 健康人指甲中尿酸的定量分析18
• 2.1.8 痛風(fēng)患者指甲中尿酸的定量分析18
• 2.2 結(jié)果與討論18-21
• 2.2.1 HPLC色譜條件的優(yōu)化及方法學(xué)驗證18-19
• 2.2.2 人體指甲中尿酸萃取方法的優(yōu)化19-20
• 2.2.3 人體指甲中UA的質(zhì)譜鑒定20
• 2.2.4 健康人十指中尿酸含量的比較20
• 2.2.5 健康人和痛風(fēng)患者指甲中尿酸含量的檢測20-21
• 2.3 人體指甲在臨床應(yīng)用中的研究展望21-29
• 第三章 硫代脯氨酸結(jié)構(gòu)同位素標記新型質(zhì)譜衍生化試劑的合成29-37
• 3.1 實驗部分29-31
• 3.1.1 儀器與試劑29
• 3.1.2 同位素標記新型質(zhì)譜衍生化試劑的設(shè)計29-30
• 3.1.3 d0/d5-BZC-TZD的合成30
• 3.1.4 d0/d5-BZC-TZD的純化30-31
• 3.1.5 新型質(zhì)譜衍生化試劑的結(jié)構(gòu)鑒定31
• 3.2 結(jié)果與討論31-37
• 3.2.1 新型質(zhì)譜衍生化試劑的合成與純化31-32
• 3.2.2 新型質(zhì)譜衍生化試劑質(zhì)譜裂解規(guī)律32-37
• 第四章 氨基官能團手性化合物分離效能評價37-40
• 4.1 實驗部分37-38
• 4.1.1 儀器與試劑37
• 4.1.2 氨基官能團手性化合物衍生化反應(yīng)37
• 4.1.3 LC-MS質(zhì)譜條件37-38
• 4.2 結(jié)果與討論38-40
• 4.2.1 氨基官能團手性化合物的效能評價38-40
• 第五章 結(jié)論40-42
• 參考文獻42-45
• 致謝45-46
• 附錄1 碩士期間的科研成果46

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