本文關(guān)鍵詞：尼古丁對(duì)雷帕霉素誘導(dǎo)痛敏的調(diào)節(jié)作用及其機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：【研究背景】疼痛是機(jī)體內(nèi)部的一種傷害性感受,可作為人體的防御性保護(hù)機(jī)制,但同時(shí)長(zhǎng)期劇烈的疼痛也會(huì)給人們帶來身體和心理上的折磨。越來越多的人在經(jīng)歷著不同程度的疼痛,長(zhǎng)期疼痛會(huì)引發(fā)各種臨床疾病的產(chǎn)生,疼痛在臨床上已經(jīng)成為最常見的病癥之一。近年來臨床調(diào)查發(fā)現(xiàn),患者在服用雷帕霉素后會(huì)引發(fā)疼痛,但又缺乏很好的治療辦法,給患者帶來了很大的困擾。臨床上常采用阿片生物堿類作為鎮(zhèn)痛藥來緩解疼痛,但長(zhǎng)期服用鎮(zhèn)痛藥物,毒性大且易導(dǎo)致成癮。目前,人們對(duì)于尼古丁治療疼痛的研究已達(dá)到了分子和細(xì)胞水平,尼古丁鎮(zhèn)痛作用強(qiáng)但其抑制疼痛發(fā)生的機(jī)制尚未得到闡明,因此對(duì)尼古丁鎮(zhèn)痛機(jī)制的研究和探討一直是近些年神經(jīng)領(lǐng)域的研究重點(diǎn),這不僅為治療疼痛增加了新的途徑,而且為發(fā)現(xiàn)、設(shè)計(jì)新的治療疼痛藥物靶點(diǎn)提供了可靠依據(jù)。【研究目的】探討尼古丁在雷帕霉素誘導(dǎo)的小鼠自發(fā)性疼痛模型中的鎮(zhèn)痛作用及其調(diào)節(jié)機(jī)制,為鎮(zhèn)痛藥物的研發(fā)提供新的靶點(diǎn)和理論依據(jù),為臨床上治療疼痛提供新的研究思路�！狙芯糠椒ā�1.小鼠腹腔注射雷帕霉素誘導(dǎo)痛覺敏感反應(yīng)的發(fā)生,將小鼠分為三組,鹽水組、雷帕霉素組和尼古丁組,通過疼痛相關(guān)的行為學(xué)實(shí)驗(yàn),包括足底機(jī)械痛閾值檢測(cè)、足底熱刺痛實(shí)驗(yàn)以及甩尾實(shí)驗(yàn)檢測(cè)。觀察在急性單次給予小鼠腹腔雷帕霉素注射和連續(xù)雷帕霉素注射之后是否可以誘導(dǎo)小鼠痛覺敏感的反應(yīng);采用Western blot和免疫熒光觀察與痛覺敏感發(fā)生密切相關(guān)的ACC腦區(qū)(前扣帶回皮層腦區(qū))中m TORC1信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)變化,從而探討雷帕霉素對(duì)m TORC1信號(hào)通路產(chǎn)生的作用。2.在給予痛覺過敏的小鼠腹腔注射尼古丁后,行為學(xué)觀察對(duì)尼古丁對(duì)小鼠痛覺產(chǎn)生的影響;通過Western blot和免疫熒光檢測(cè)ACC腦區(qū)中m TORC1信號(hào)通路中下游蛋白表達(dá)的變化,從而探討尼古丁通過作用于m TORC1信號(hào)通路調(diào)節(jié)痛閾的相關(guān)作用機(jī)制;在預(yù)先給予小鼠腹腔注射α4β2 n ACh R拮抗劑DHβE或α7 n ACh R拮抗劑MLA的情況下,行為學(xué)實(shí)驗(yàn)觀察兩個(gè)拮抗劑分別對(duì)尼古丁抑制雷帕霉素誘導(dǎo)自發(fā)痛的影響,闡明尼古丁可能的作用途徑。3.通過膜片鉗技術(shù)檢測(cè)雷帕霉素對(duì)神經(jīng)元興奮性的影響,觀察指標(biāo)包括細(xì)胞動(dòng)作電位的變化、第一個(gè)動(dòng)作電位潛伏期,以及觀察細(xì)胞靜息膜電位的變化。在人工腦脊液灌流尼古丁后,實(shí)驗(yàn)觀察對(duì)上述指標(biāo)產(chǎn)生的影響,闡明尼古丁對(duì)神經(jīng)元興奮性的作用,進(jìn)一步驗(yàn)證尼古丁對(duì)于雷帕霉素誘發(fā)痛敏的抑制作用�！狙芯拷Y(jié)果】1.在給予小鼠腹腔注射雷帕霉素(10mg/kg)后,發(fā)現(xiàn)雷帕霉素可誘導(dǎo)小鼠出現(xiàn)痛覺敏感現(xiàn)象產(chǎn)生,具體表現(xiàn)為在足底機(jī)械痛檢測(cè)中雷帕霉素組小鼠的縮腿閾值降低和足底熱刺痛檢測(cè)中小鼠的縮腿潛伏期顯著降低,在甩尾實(shí)驗(yàn)檢測(cè)中小鼠的甩尾潛伏期也明顯降低;Western blot和免疫熒光染顯示小鼠前扣帶回皮層腦區(qū)中m TORC1下游分子表達(dá)下調(diào),提示雷帕霉素誘導(dǎo)的痛敏可能與抑制m TORC1信號(hào)通路有關(guān)。2.給予雷帕霉素誘導(dǎo)痛覺過敏的小鼠腹腔注射尼古丁(1.5mg/kg)后,行為學(xué)顯示尼古丁組小鼠的痛覺過敏行為得到緩解,具體表現(xiàn)為足底機(jī)械痛檢測(cè)中小鼠的縮腿閾值升高和足底熱刺痛檢測(cè)中小鼠縮腿潛伏期升高,以及在甩尾實(shí)驗(yàn)中小鼠的甩尾潛伏期也升高;在給予正常小鼠腹腔注射尼古丁(1.5mg/kg)處理后,行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示尼古丁對(duì)正常小鼠的痛閾值也有一定影響,具體表現(xiàn)為足底機(jī)械痛實(shí)驗(yàn)和熱刺痛實(shí)驗(yàn)中小鼠的縮腿閾值和縮腿潛伏期與對(duì)照組比較具有顯著性差異。在Western blot和免疫熒光染色顯示尼古丁通過激活m TORC1通路下游底物S6K1負(fù)反饋調(diào)節(jié)作用,增強(qiáng)IRS1磷酸化水平,從而降低了ERK的表達(dá)活性,逆轉(zhuǎn)了雷帕霉素對(duì)m TORC1信號(hào)通路的作用,這可能是其發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用的分子生物學(xué)機(jī)制;同時(shí)尼古丁對(duì)正常小鼠ACC腦區(qū)中m TORC1相關(guān)蛋白表達(dá)變化和模型結(jié)果趨勢(shì)一致。3.在預(yù)先分別給予小鼠腹腔注射α4β2 n ACh R拮抗劑DHβE或α7 n ACh R拮抗劑MLA處理后,發(fā)現(xiàn)尼古丁的鎮(zhèn)痛作用被其受體亞基的拮抗劑所抑制,提示α4β2和α7n ACh R兩個(gè)受體參與了尼古丁鎮(zhèn)痛作用的調(diào)節(jié)。4.通過細(xì)胞膜片鉗實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)雷帕霉素使神經(jīng)元?jiǎng)幼麟娢话l(fā)放增加,第一個(gè)動(dòng)作電位出現(xiàn)時(shí)間加快,同時(shí)也使神經(jīng)元靜息膜電位降低,表明雷帕霉素能夠提高ACC區(qū)錐體神經(jīng)元興奮性。在給予腦片灌流尼古丁后,觀察結(jié)果發(fā)現(xiàn)尼古丁可抑制雷帕霉素誘導(dǎo)的神經(jīng)元興奮性升高作用,同時(shí)使神經(jīng)元靜息膜電位也相應(yīng)升高,這說明尼古丁能夠抑制雷帕霉素誘導(dǎo)的神經(jīng)元興奮性增強(qiáng),初步闡明尼古丁在這一疼痛模型中發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用的電生理學(xué)機(jī)制�！狙芯拷Y(jié)論】研究顯示尼古丁可能通過激活m TORC1信號(hào)通路的負(fù)反饋調(diào)節(jié),影響IRS1磷酸化水平,導(dǎo)致ERK的活性下降,同時(shí)減弱雷帕霉素引起的神經(jīng)元興奮性增強(qiáng),從而緩解雷帕霉素誘導(dǎo)的觸摸痛和自發(fā)性痛敏的發(fā)生,這一作用可能通過α4β2和α7n ACh R調(diào)節(jié)。本課題初步揭示了尼古丁在雷帕霉素誘導(dǎo)痛敏中發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用的機(jī)制,為鎮(zhèn)痛藥物的研發(fā)提供新的靶點(diǎn)和理論依據(jù),為臨床上疼痛治療提供新的研究思路。
【關(guān)鍵詞】：痛敏 雷帕霉素 尼古丁 mTORC1 ERK ACC
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R402
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表5-6
• 中文摘要6-9
• Abstract9-12
• 前言12-14
• 文獻(xiàn)回顧14-22
• 1 材料22-25
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物22
• 1.2 主要試劑和儀器22-25
• 1.2.1 行為學(xué)實(shí)驗(yàn)主要試劑22
• 1.2.2 行為學(xué)實(shí)驗(yàn)主要儀器22
• 1.2.3 Western blot和免疫熒光實(shí)驗(yàn)主要試劑22-23
• 1.2.4 Western blot和免疫熒光實(shí)驗(yàn)主要儀器23-24
• 1.2.5 電生理主要試劑24-25
• 1.2.6 電生理主要儀器25
• 2 方法25-32
• 2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組處理25-26
• 2.1.1 雷帕霉素誘發(fā)痛實(shí)驗(yàn)分組25-26
• 2.1.2 尼古丁對(duì)正常小鼠作用實(shí)驗(yàn)分組26
• 2.2 足底機(jī)械痛閾值檢測(cè)26
• 2.3 足底熱刺痛檢測(cè)26-27
• 2.4 甩尾實(shí)驗(yàn)27
• 2.5 Western blot檢測(cè)27-29
• 2.5.1 樣品制備27
• 2.5.2 SDS－PAGE電泳27-28
• 2.5.3 轉(zhuǎn)膜和封閉28
• 2.5.4 免疫雜交28
• 2.5.5 熒光檢測(cè)28-29
• 2.6 免疫熒光檢測(cè)29-30
• 2.6.1 腦片制備29
• 2.6.2 熒光染色29-30
• 2.7 電生理實(shí)驗(yàn)30-31
• 2.7.1 ACC區(qū)腦片的制備30
• 2.7.2 記錄電極的拉制30-31
• 2.7.3 全細(xì)胞膜片鉗記錄31
• 2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析31-32
• 3 結(jié)果32-43
• 3.1 雷帕霉素誘導(dǎo)小鼠出現(xiàn)痛覺敏感反應(yīng)32
• 3.2 尼古丁可抑制雷帕霉素誘導(dǎo)的痛覺敏感反應(yīng)32-35
• 3.2.1 尼古丁對(duì)急性雷帕霉素誘導(dǎo)痛敏的抑制作用32-33
• 3.2.2 尼古丁對(duì)慢性雷帕霉素處理誘發(fā)痛敏反應(yīng)的作用33-34
• 3.2.3 尼古丁對(duì)正常小鼠痛閾值的影響34-35
• 3.3 尼古丁通過上調(diào)m TORC1信號(hào)通路表達(dá)調(diào)節(jié)痛敏35-40
• 3.3.1 尼古丁抑制急性雷帕霉素誘導(dǎo)的痛敏35-36
• 3.3.2 尼古丁抑制慢性雷帕霉素誘導(dǎo)的痛敏36-39
• 3.3.3 尼古丁對(duì)正常小鼠m TORC1信號(hào)通路相關(guān)蛋白的影響39-40
• 3.4 尼古丁抑制了雷帕霉素引起的神經(jīng)元興奮性增強(qiáng)40-41
• 3.5 阻斷 α4β2、α7n ACh R抑制尼古丁對(duì)雷帕霉素誘導(dǎo)痛敏的作用41-43
• 4 討論43-44
• 小結(jié)44-45
• 參考文獻(xiàn)45-52
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷與研究成果52-53
• 致謝53

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1 申文;蘇小虎;張井浪;唐元章;;肉毒毒素A對(duì)慢性坐骨神經(jīng)結(jié)扎大鼠機(jī)械痛敏和熱痛敏的影響[J];中國(guó)藥理學(xué)通報(bào);2008年12期

2 陳助華,陳培熹;電針對(duì)體感皮層痛敏細(xì)胞放電時(shí)鎖與非時(shí)鎖反應(yīng)的影響[J];中山醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1991年03期

3 楊向紅,王彥青,高秀,吳根誠(chéng);電針對(duì)大鼠神經(jīng)痛痛敏分?jǐn)?shù)的影響[J];針刺研究;2002年01期

4 李軼聰;李悅;付寶軍;劉芳;李恩有;;鞘內(nèi)注射氟代檸檬酸對(duì)慢性坐骨神經(jīng)結(jié)扎大鼠機(jī)械痛敏和熱痛敏的影響[J];實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué);2011年03期

5 周紅杰,黎海蒂,李希成,阮懷珍;一氧化氮在ACTH 抑制大鼠痛敏中的作用觀察[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);1999年08期

6 王彥;;紫外線B誘發(fā)的大鼠痛敏模型[J];中國(guó)疼痛醫(yī)學(xué)雜志;2007年06期

7 陳榮貴;孔微微;葛大龍;羅層;胡三覺;;小鼠背根節(jié)慢性壓迫誘致的雙側(cè)機(jī)械性痛敏和熱痛敏行為(英文)[J];Neuroscience Bulletin;2011年04期

8 周樹勤;王忱;鄭鎮(zhèn)偉;;2-氨基-5-磷�；焖狨�(duì)大鼠坐骨神經(jīng)慢性壓迫性損傷的機(jī)械痛敏和熱痛敏的影響[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2009年17期

9 馮思哲,魏學(xué)忠,章翔;保留神經(jīng)損傷誘致中樞痛敏的發(fā)生部位及其作用方式的實(shí)驗(yàn)觀察[J];中國(guó)臨床康復(fù);2004年34期

10 馬國(guó)平;楊京利;田玉科;劉菊英;;環(huán)氧酶2介導(dǎo)鞘內(nèi)注射血小板活化因子誘發(fā)的觸覺痛敏和熱痛敏[J];中國(guó)康復(fù);2009年02期

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1 陳會(huì)生;實(shí)驗(yàn)性鏡像痛敏及其神經(jīng)機(jī)制研究[D];中國(guó)人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué);2003年

2 孫珊;脊髓膠質(zhì)細(xì)胞參與電針對(duì)關(guān)節(jié)炎大鼠痛敏反應(yīng)的抑制[D];復(fù)旦大學(xué);2006年

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1 李碩;尼古丁對(duì)雷帕霉素誘導(dǎo)痛敏的調(diào)節(jié)作用及其機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2016年

2 宋雨田;多巴胺D2受體-Cx43信號(hào)通路調(diào)控鏡像痛敏的分子與細(xì)胞機(jī)制[D];延安大學(xué);2015年

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  本文關(guān)鍵詞：尼古丁對(duì)雷帕霉素誘導(dǎo)痛敏的調(diào)節(jié)作用及其機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：483860