本文關(guān)鍵詞：糞腸球菌對(duì)利奈唑胺低水平耐藥機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:腸球菌是造成醫(yī)院感染的主要條件致病菌,利奈唑胺對(duì)其具有良好的抗菌活性。然而隨著利奈唑胺的廣泛使用,現(xiàn)已出現(xiàn)了對(duì)利奈唑胺耐藥的腸球菌,利奈唑胺對(duì)治療腸球菌造成的感染已面臨嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)。目前腸球菌利奈唑胺耐藥已明確的耐藥機(jī)制包括23S rRNA核糖體突變、核糖體蛋白L3,L4突變以及由多重耐藥cfr基因造成的利奈唑胺耐藥,然而有相當(dāng)數(shù)量的利奈唑胺低水平耐藥腸球菌缺乏明確的耐藥機(jī)制。為探討該類(lèi)腸球菌的耐藥機(jī)制,本研究首先對(duì)此類(lèi)低水平耐藥糞腸球菌采用利奈唑胺進(jìn)行體外誘導(dǎo),觀察該類(lèi)耐藥腸球菌是否能在利奈唑胺體外誘導(dǎo)下產(chǎn)生高水平耐藥,隨后進(jìn)一步深入探索利奈唑胺低水平耐藥機(jī)制,為完善利奈唑胺耐藥研究,發(fā)現(xiàn)新的耐藥靶標(biāo)提供研究基礎(chǔ)。方法:收集5株耐藥機(jī)制不明的利奈唑胺低水平耐藥糞腸球菌,對(duì)其進(jìn)行利奈唑胺體外誘導(dǎo),觀察耐藥菌MIC值的變化。隨后采用PCR方法擴(kuò)增誘導(dǎo)菌23S rRNA核糖體V區(qū)及L3,L4核糖體蛋白是否發(fā)生突變,測(cè)序結(jié)果與利奈唑胺敏感野生株ATCC 29212進(jìn)行對(duì)比分析。誘導(dǎo)菌V區(qū)的G2576T突變及突變拷貝數(shù)則采用限制性?xún)?nèi)切酶酶切及PCR擴(kuò)增和測(cè)序方法檢測(cè)。采用結(jié)晶紫染色生物膜半定量試驗(yàn)分析耐藥菌生物膜形成能力;用HPLC/UV對(duì)耐藥菌利奈唑胺攝入量進(jìn)行分析;采用4種常見(jiàn)外排泵抑制劑,包括利血平、羰基氰氯苯腙、維拉帕米及蘭索拉唑?qū)δ退幘赡艽嬖诘耐馀畔到y(tǒng)進(jìn)行抑制分析;透射電鏡觀察耐藥菌細(xì)胞壁厚度的變化。結(jié)果:通過(guò)利奈唑胺體外持續(xù)誘導(dǎo),5株耐藥菌誘導(dǎo)后MIC值較原菌株獲得了8~32倍增加,最高M(jìn)IC值超過(guò)256 mg/L;其中有3株菌23S rRNA的V583區(qū)域發(fā)生了G2576T突變,其余2株菌未發(fā)現(xiàn)V區(qū)突變;所有誘導(dǎo)菌均未發(fā)現(xiàn)L3,L4核糖體蛋白氨基酸突變。MIC值為16 mg/L的耐藥菌比MIC為8 mg/L的耐藥菌以及ATCC 29212具有更強(qiáng)的生物膜形成能力;4種外排泵抑制劑使用前后耐藥菌利奈唑胺MIC值無(wú)明顯改變;透射電鏡觀察細(xì)菌細(xì)胞壁厚度顯示利奈唑胺耐藥菌與敏感菌之間細(xì)胞壁厚度無(wú)明顯差異,而耐藥菌在細(xì)菌1/2MIC利奈唑胺抗生素壓力生長(zhǎng)下較無(wú)抗生素壓力培養(yǎng),細(xì)菌的細(xì)胞壁明顯增厚,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義結(jié)論:利奈唑胺在體外可以誘導(dǎo)低水平利奈唑胺耐藥糞腸球菌MIC值迅速增加,其V區(qū)G2576T突變與高水平耐藥密切相關(guān),且突變拷貝數(shù)與MIC值增高呈正相關(guān)。利奈唑胺低水平耐藥未發(fā)現(xiàn)由外排泵介導(dǎo)利奈唑胺耐藥的明顯證據(jù),其耐藥可能與細(xì)菌細(xì)胞壁增厚導(dǎo)致利奈唑胺攝入量減少有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：糞腸球菌 利奈唑胺耐藥 外排泵 細(xì)胞壁 生物膜
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R446.5
【目錄】：

• 英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 前言10-12
• 第一部分 體外誘導(dǎo)利奈唑胺低水平耐藥糞腸球菌V區(qū)突變及相關(guān)耐藥研究12-23
• 1.材料12-15
• 2.方法15-17
• 3.結(jié)果17-21
• 4.討論21-23
• 第二部分 低水平利奈唑胺耐藥糞腸球菌耐藥機(jī)制探索研究23-32
• 1.材料23-24
• 2.方法24-27
• 3.結(jié)果27-29
• 4.討論29-32
• 全文總結(jié)32-33
• 參考文獻(xiàn)33-37
• 文獻(xiàn)綜述37-46
• 參考文獻(xiàn)42-46
• 致謝46-47
• 攻讀碩士期間的發(fā)表的學(xué)術(shù)論文47

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 李多云;余治健;徐俊;劉曉軍;鄧名貴;潘偉光;鄭金鑫;陳重;鄧啟文;;利奈唑胺體外誘導(dǎo)糞腸球菌耐藥株23S rRNA V區(qū)基因突變位點(diǎn)分析[J];中國(guó)病原生物學(xué)雜志;2014年04期

2 瞿婷婷;俞云松;孫自鏞;陳中舉;徐英春;張小江;汪復(fù);朱德妹;胡付品;卓超;蘇丹虹;張泓;孔菁;張朝霞;季萍;王傳清;王愛(ài)敏;倪語(yǔ)星;孫景勇;單斌;杜艷;胡云建;艾效曼;徐元宏;沈繼錄;黃文祥;賈蓓;魏蓮花;吳玲;;2011年中國(guó)CHINET腸球菌屬細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)[J];中國(guó)感染與化療雜志;2013年05期

  本文關(guān)鍵詞：糞腸球菌對(duì)利奈唑胺低水平耐藥機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：476106