第一部分利用基質(zhì)輔助激光解吸附電離飛行時(shí)間質(zhì)譜對脊髓性肌萎縮癥進(jìn)行分子檢測的應(yīng)用研究背景與目的:脊髓性肌萎縮癥(spinal muscular atrophy,SMA)是一種具有臨床表型異質(zhì)性的常染色體隱性遺傳病。據(jù)了解,目前中國每年大約出生1700～2830名SMA患者,SMA病人數(shù)量大約為30000～50000人。開展早期診斷、產(chǎn)前診斷及遺傳咨詢對于降低SMA患兒出生數(shù)量、病人病情的判斷和治療、減輕社會經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)具有重要的意義。96.4%的SMA由于SMN1基因的純合缺失發(fā)生導(dǎo)致,剩下3.6%SMA病人發(fā)病原因是一個(gè)SMN1基因缺失,另一個(gè)出現(xiàn)點(diǎn)突變。與SMN1高度同源的SMN2基因功能大約只有SMN1基因的10%,但是由于合成蛋白累積的效應(yīng),SMN2為SMA疾病表型的重要修飾基因。此外已有相關(guān)報(bào)道,NAIP、GTH2F2、H4F5基因均與SMA疾病相關(guān)。目前可用于檢測SMA疾病的方法主要包括 PCR-SSCP、PCR-RFLP、Real-time PCR、PCR-DHPLC、AS-PCR、MLPA和Sanger測序、二代測序等,但是由于SMA疾病涉及相關(guān)基因結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性、臨床表型的異...

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【學(xué)位級別】：碩士

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圖１－３飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)原理??Ｆｉｇｕｒｅｌ－３?ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ?ＭＳ?ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ??

芯片基質(zhì)結(jié)合后，經(jīng)激光激發(fā)及在外加電場的作用后，延伸產(chǎn)物分子飛行穿越??真空環(huán)境到達(dá)檢測位置，飛行時(shí)間與延伸分子的荷／質(zhì)比成一定比例關(guān)系，??ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ?ＭＳ檢測原理如圖１－３所示。因此，飛行時(shí)間質(zhì)譜能根據(jù)所延伸單個(gè)??堿基分子量大小差異對突變位點(diǎn)基因型進(jìn)行判斷，檢測分子....

圖４－１引物有效性及特異性驗(yàn)證電泳圖??？４－ｌ?Ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｆｏｒ?ｐｒｉｍｅｒｓ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ?ａｎｄ?ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ??

４．１擴(kuò)增引物的特異性和有效性驗(yàn)證??８對擴(kuò)增引物單獨(dú)擴(kuò)增后，以凝膠瓊脂糖電泳分析。通過觀察電泳有無雜帶??以及目的片段判斷所設(shè)計(jì)引物的特異性以及有效性。電泳結(jié)果如圖４－１所示。目??的條帶分子量大小正確，條帶單一，無非特異性的擴(kuò)增。說明擴(kuò)增引物能成功??擴(kuò)增，且特異性好。??ｏ....

圖４－２野生型和突變性質(zhì)粒測序結(jié)果圖??Ｆｉｇｕｒｅ?４－２?Ｗｉｌｄ－ｔｙｐｅ?ａｎｄ?ｍｕｔａｎｔｉｏｎａｌ?ｐｌａｓｍｉｄ?ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ?ｒｅｓｕｌｔｓ，?ＭＵＴ?ｓｈｏｗｓ?ｔ?

４．１擴(kuò)增引物的特異性和有效性驗(yàn)證??８對擴(kuò)增引物單獨(dú)擴(kuò)增后，以凝膠瓊脂糖電泳分析。通過觀察電泳有無雜帶??以及目的片段判斷所設(shè)計(jì)引物的特異性以及有效性。電泳結(jié)果如圖４－１所示。目??的條帶分子量大小正確，條帶單一，無非特異性的擴(kuò)增。說明擴(kuò)增引物能成功??擴(kuò)增，且特異性好。??ｏ....

圖１－２?ＴａｑＭａｎ探針法及跨越斷裂點(diǎn)ＰＣＲ原理??

??原理見圖１－２Ａ），因此可以通過檢測兩個(gè)內(nèi)參基因熒光信號的有無及對Ｃｔ值計(jì)??算，判斷ＷＧＡ產(chǎn)物中ｇＤＮＡ是否被成功擴(kuò)增及擴(kuò)增含量；最后通過短片段跨??越斷裂點(diǎn)ＰＣＲ?（Ｇａｐ－ＰＣＲ）技術(shù)實(shí)現(xiàn)胚胎快速分型，Ｇａｐ－ＰＣＲ原理是在缺失斷??裂點(diǎn)兩端設(shè)計(jì)擴(kuò)增引物，只有當(dāng)缺失情況....

本文編號：4040410