基因治療已經(jīng)開始應(yīng)用于獲得性或者是原發(fā)性疾病的診斷治療中�；蜣D(zhuǎn)染是關(guān)鍵步驟,而轉(zhuǎn)染載體的研究成為研究的熱點(diǎn)。本文采用生物玻璃和雙親性殼聚糖的復(fù)合物作為研究對(duì)象,來探究其在基因轉(zhuǎn)染的作用及其機(jī)理。本文制備出生物玻璃,其粒徑通過SEM和Zeta電位儀測(cè)得在100-150 nm范圍內(nèi),通過TEM觀察形貌,其類似于海膽形狀,內(nèi)部具有豐富的納米孔徑結(jié)構(gòu)。另外,對(duì)單純的殼聚糖進(jìn)行修飾使得其在水溶液中的溶解性能提高。通過在殼聚糖的側(cè)鏈位置引入親水性鏈段mPEG和疏水鏈段PCL,使得其成為雙親性殼聚糖。通過UV表征,雙親性殼聚糖顯示出了特有的峰位,測(cè)得CMC值;通過GPC測(cè)得雙親性殼聚糖的數(shù)均分子量和重均分子量;通過FT-IR和NMR對(duì)其化學(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行了表征,結(jié)果顯示成功接枝上兩鏈段。通過基因重組技術(shù),成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒-成骨生長(zhǎng)肽質(zhì)粒pOGP。該質(zhì)粒能夠表達(dá)成骨生長(zhǎng)肽和綠色熒光蛋白。其質(zhì)粒上還含有啟動(dòng)子,終止子,抗抗生素(Kana霉素)序列等。質(zhì)粒的構(gòu)建載體為PAcGFP1-N1,大小在4726 bp。將生物玻璃和雙親性殼聚糖以合適的比例與pOGP質(zhì)粒復(fù)合,然后深入研究轉(zhuǎn)染及其機(jī)理。首先,研究了生物玻...

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1-1基因治療的流程

圖1-1基因治療的流程Fig.1-1Theprocessofgenetherapy腺病毒及慢病毒等，這類載體一般轉(zhuǎn)染效率較高，但是存在著生NA有可能整合到宿主細(xì)胞內(nèi)，生物潛在毒性較大[18-22]。另一類載體有脂質(zhì)體、殼聚糖、聚乙烯亞胺、二氧化硅、鈣磷體系等低免....

圖1-2殼聚糖的轉(zhuǎn)染路徑Fig.1-2Thetransfectionpathwayofchitosan

第一章緒論達(dá)細(xì)胞膜時(shí)，刺激膜外蛋白，內(nèi)陷形成囊泡，將脂質(zhì)體包裹進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部，在細(xì)胞內(nèi)部由于脂質(zhì)體與內(nèi)吞膜上的磷脂發(fā)生作用，囊泡溶解，遺傳物質(zhì)釋放從而有機(jī)會(huì)進(jìn)入細(xì)胞核實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)染。陽離子脂質(zhì)體在進(jìn)入血液后，尤其是遇見血清后，容易團(tuán)聚，或是被降解。所以一般要對(duì)脂質(zhì)體進(jìn)行修飾，提高在體內(nèi)....

圖1-3碳納米管轉(zhuǎn)染各類遺傳物質(zhì)Fig.1-3Thegenetransfectionofcarbonnanotubes

殼聚糖是一類常見的轉(zhuǎn)染載體（圖1-2），而殼寡糖是殼聚糖部分降解的產(chǎn)物[31-34]，是分子量較小的物質(zhì)。殼聚糖由于存在大量的氨基，所以成為潛在的轉(zhuǎn)染載體但是同時(shí)它也存在大量的羥基基團(tuán)。這些基團(tuán)使得分子間氫鍵作用增加，水溶性大大降低，從而影響了轉(zhuǎn)染性能。在酸性溶液中，殼聚糖的質(zhì)....

圖1-4熔融法生物玻璃45S5Fig.1-4ThetraditionalBioactiveglass45S5

現(xiàn)磷酸鈣具有轉(zhuǎn)染進(jìn)入KB細(xì)胞的能力。現(xiàn)在研究者趨向于研究尺寸可控染DNA的能力。如將聚乙二醇-聚天冬氨酸共聚物與磷酸鈣復(fù)合形成納米徑可控，轉(zhuǎn)染效率較高，細(xì)胞毒性較低的優(yōu)點(diǎn)。的納米金適用范圍較廣泛。用于cRNA，mRNA,DNA的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中。Schm55作為較為理想....

本文編號(hào)：4032915