時間分辨熒光微球是一種性能優(yōu)異的新興免疫標(biāo)記物,本研究將時間分辨熒光微球作為標(biāo)記物應(yīng)用于免疫層析平臺與磁分離時間分辨免疫分析平臺上,并對兩平臺進(jìn)行全面而準(zhǔn)確的試劑性能評價和臨床可行性評估。本課題實(shí)驗(yàn)內(nèi)容主要分為三大部分:(1)研制基于銪螯合物熒光微球的免疫層析定量檢測NGAL試紙條;(2)研制基于銪螯合物熒光微球的免疫層析定量檢測Anti-HBc試紙條;(3)研制基于時間分辨熒光微球的AFP/Freeβ-HCG雙標(biāo)記磁分離時間分辨熒光免疫分析試劑。實(shí)驗(yàn)設(shè)計涵蓋了建立和優(yōu)化反應(yīng)體系、在最優(yōu)的反應(yīng)體系下全面評價自制試劑的各項(xiàng)性能指標(biāo)作,包括劑量-反應(yīng)曲線、分析靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度、特異性、抗干擾性分析以及臨床可行性。實(shí)驗(yàn)一結(jié)果:(1)基于銪螯合物熒光微球的免疫層析定量檢測NGAL試紙條的分析靈敏度為0.30 ng/mL,線性范圍達(dá)10～6000 ng/mL�；厥章试�96.80%～108.08%之間,準(zhǔn)確度好;分析內(nèi)和分析間變異系數(shù)分別在為5.23%～8.19%和7.02%～9.24%之間;未與高濃度的α1-MG、HGF、α1-AAG和MMP-2發(fā)生交叉反應(yīng),且不受高濃度血紅蛋白、甘油三酯...

【文章頁數(shù)】：139 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖２消除背景勞光干擾的原理示意圖（引自ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ公司）??Ｆｉｇ．２?ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｏｆ?ｅｌｉｍｉｎａｔｅ?ｔｈｅ?ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ?ｏｆ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｏｆ?ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ?（ｆｒｏｍ?ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）??

衰變時間的差異，在樣品被激發(fā)光激發(fā)后、熒光信號收集之前的這段時間，通??過延遲一定時間，等待測樣品中短壽命的背景熒光完全泮滅后，再采集和檢測??鑭系元素螯合物特異性長壽命熒光信號，原理如圖２所示。利用時間延遲技術(shù)??將特異性熒光與非特異性熒光分辨開來，極大減少本底干擾，使理論本底....

圖３四種不同的鑭系元素發(fā)射波長（引自ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ公司）??

圖２消除背景勞光干擾的原理示意圖（引自ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ公司）??Ｆｉｇ．２?ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｏｆ?ｅｌｉｍｉｎａｔｅ?ｔｈｅ?ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ?ｏｆ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｏｆ?ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ?（ｆｒｏｍ?ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）??根據(jù)各鑭系離子螯合....

圖１－３樣品墊預(yù)處理緩沖液配方的優(yōu)化??Ｆｉｇ．?１－３?Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ?ｏｆ?ｓａｍｐｌｅ?ｐａｄ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ?ｂｕｆｆｅｒ??

圖１－３樣品墊預(yù)處理緩沖液配方的優(yōu)化??Ｆｉｇ．?１－３?Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ?ｏｆ?ｓａｍｐｌｅ?ｐａｄ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ?ｂｕｆｆｅｒ??從圖１－３結(jié)果顯示：當(dāng)樣品墊預(yù)處理液不添加Ｓ９時，ＡｂｓＨｃ試紙條的ＡｂｓＨｃ??值較低，而ｂａｓ....

圖１－４偶聯(lián)緩沖液的優(yōu)化??Ｆｉｇ．１－４?Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｃｏｕｐｌｉｎｇ?ｂｕｆｆｅｒ??

７＿０）和?２５ｍｍｏｌ／ＬＣＢＳ?（ｐＨ８．０）。取定標(biāo)品?Ａ?（Ｏｎｇ／ｍＬ）與?Ｆ?（６０００?ｎｇ／ｍＬ）??兩定標(biāo)品作為樣本，按照檢測流程進(jìn)行檢測（ｎ＝５），記錄各自的ＨＴ／ＨＣ并對計??算其比值（即信噪比Ｓ／Ｎ），結(jié)果見圖１－４。??＝?；?１０００??１〇?—??１....

本文編號：3900583