目的:通過體外直接接觸共培養(yǎng)C57小鼠肺微血管內(nèi)皮細胞(MEC)與GFP小鼠造血干細胞(HSC),并在共培養(yǎng)體系中加入Notch抑制劑DAPT,在第4天檢測Notch分子的表達,研究MEC促進HSC增殖的分子機制及Notch抑制劑對肺MEC促進HSC增殖的作用,初步探討Notch信號通路對HSC的影響,為體外擴增HSC提供新的方向和為血液系統(tǒng)疾病尋找潛在的治療靶點。方法:(1)C57小鼠肺組織經(jīng)過I型膠原酶消化獲得MEC,通過免疫熒光及流式細胞術(shù)檢測其CD31、CD34、CD45、vWF表達情況,連續(xù)8天觀察P1代MEC生長情況,每天消化3孔用于細胞的計數(shù)并繪制MEC的生長曲線。(2)采取Ficoll密度梯度離心法從GFP小鼠的骨髓分離得到單個核細胞(MNCs),然后利用miniMACS磁珠分選儀分選得到CD117+細胞,利用流式細胞術(shù)檢測HSC含量及HSC CD34CD117共表達率。(3)體外直接接觸共培養(yǎng)骨髓CD117+細胞與P1代的MEC,并在培養(yǎng)體系中加入DAPT,分組為:HSC組、HSC+EC組、HSC+EC+DAPT組、HSC+DAPT組,每組3個復孔。培養(yǎng)至第4天收集造...

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【學位級別】：碩士

圖1固定好的C57小鼠

圖2-1原代4天（×100）

圖2-2原代6天（×100）

圖2-3原代8天（×100）

本文編號：3883057