本研究擬使用腺病毒介導的CRISPR/Cas9系統(tǒng)靶向剪切AAVS1位點,為實現(xiàn)AAVS1位點基因定點插入奠定基礎。設計針對AAVS1位點的gRNA序列,連接到pENTRY-U6-h EF1a-Cas9載體,通過Gateway技術重組到腺病毒骨架質粒pAD,轉染293A細胞包裝腺病毒。腺病毒感染Hela細胞系,使用T7E1酶切及測序檢測AAVS1位點的打靶效率。T7EI酶切結果顯示腺病毒介導的CRISPR/Cas9系統(tǒng)剪切效率達到28.5%。腺病毒介導的CRISPR/Cas9系統(tǒng)對AAVS1位點成功實施了剪切,為下一步在Hela細胞內進行基因定點敲入及基因治療奠定了基礎。

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【文章目錄】：
1 結果與分析
    1.1 sg RNA序列的設計
    1.2 特異識別AAVS1位點的sg RNA表達載體的構建
    1.3 腺病毒的包裝
    1.4 腺病毒敲除效率檢測
    1.5 sg RNA識別位點的測序
2 討論
3 材料與方法
    3.1 試劑材料
    3.2 細胞株及細胞培養(yǎng)
    3.3 引物合成
    3.4 sg RNA序列的設計
    3.5 特異識別AAVS1位點的sg RNA表達載體的構建
    3.6 腺病毒的包裝
    3.7 腺病毒敲除效率檢測
作者貢獻



本文編號：3878310