發(fā)布時(shí)間：2024-01-14 13:22

　　本研究擬使用腺病毒介導(dǎo)的CRISPR/Cas9系統(tǒng)靶向剪切AAVS1位點(diǎn),為實(shí)現(xiàn)AAVS1位點(diǎn)基因定點(diǎn)插入奠定基礎(chǔ)。設(shè)計(jì)針對(duì)AAVS1位點(diǎn)的gRNA序列,連接到pENTRY-U6-h EF1a-Cas9載體,通過Gateway技術(shù)重組到腺病毒骨架質(zhì)粒pAD,轉(zhuǎn)染293A細(xì)胞包裝腺病毒。腺病毒感染Hela細(xì)胞系,使用T7E1酶切及測(cè)序檢測(cè)AAVS1位點(diǎn)的打靶效率。T7EI酶切結(jié)果顯示腺病毒介導(dǎo)的CRISPR/Cas9系統(tǒng)剪切效率達(dá)到28.5%。腺病毒介導(dǎo)的CRISPR/Cas9系統(tǒng)對(duì)AAVS1位點(diǎn)成功實(shí)施了剪切,為下一步在Hela細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行基因定點(diǎn)敲入及基因治療奠定了基礎(chǔ)。

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 結(jié)果與分析
    1.1 sg RNA序列的設(shè)計(jì)
    1.2 特異識(shí)別AAVS1位點(diǎn)的sg RNA表達(dá)載體的構(gòu)建
    1.3 腺病毒的包裝
    1.4 腺病毒敲除效率檢測(cè)
    1.5 sg RNA識(shí)別位點(diǎn)的測(cè)序
2 討論
3 材料與方法
    3.1 試劑材料
    3.2 細(xì)胞株及細(xì)胞培養(yǎng)
    3.3 引物合成
    3.4 sg RNA序列的設(shè)計(jì)
    3.5 特異識(shí)別AAVS1位點(diǎn)的sg RNA表達(dá)載體的構(gòu)建
    3.6 腺病毒的包裝
    3.7 腺病毒敲除效率檢測(cè)
作者貢獻(xiàn)



本文編號(hào)：3878310