染色體微缺失和微重復(fù)與許多疾病的發(fā)生有關(guān),22ql1.2微缺失綜合征、22q1 1.2微重復(fù)綜合征以及7q1 1.23微缺失綜合征和7q1 1.23微重復(fù)綜合征均屬于較常見的染色體遺傳病。這類疾病患者的臨床表型復(fù)雜多樣,危及到人體多個(gè)器官的正常發(fā)育,且預(yù)后不良,因此早期篩查和診斷極為重要。實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)作為重要的檢測手段,已經(jīng)廣泛地應(yīng)用于基因突變、基因拷貝數(shù)變異等的檢測,具有檢測時(shí)間短、靈敏度高、特異性好、閉管操作無污染、自動(dòng)化程度高等優(yōu)勢。本課題利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)結(jié)合DNA序列相似性原理,檢測上述常見的4種染色體微缺失和微重復(fù)。熒光探針可與靶序列和內(nèi)參序列特異性結(jié)合,隨后發(fā)生熔解產(chǎn)生具有不同Tm值(DNA熔解溫度)的產(chǎn)物峰,可根據(jù)專業(yè)軟件給出的峰高值(Rm)計(jì)算靶序列與參考序列的Rm比值(Ratio值),以實(shí)現(xiàn)對待測基因拷貝數(shù)的相對定量。因參考序列與檢測靶序列具有高度相似性,設(shè)計(jì)一對引物即可實(shí)現(xiàn)對靶序列和相似序列的同步擴(kuò)增,保證了 PCR擴(kuò)增效率的一致性。最后,通過將多個(gè)檢測片段得到的Ratio值進(jìn)行歸一化處理后求平均,即為待測標(biāo)本的相對拷貝數(shù)。本課題針對22q1 1...

【文章頁數(shù)】：91 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    第一節(jié) 實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)概述
    第二節(jié) 染色體亞微觀變異及其發(fā)生機(jī)制概述
    第三節(jié) 論文的提出和創(chuàng)新點(diǎn)
    參考文獻(xiàn)
第二章 探針熔解曲線分析用于22q11.2DS及22q11.2微重復(fù)綜合征檢測的研究
    第一節(jié) 引言
        1.1 22q11.2 DS、22q11.2微重復(fù)綜合征概述
        1.2 22q11.2 DS、22q11.2微重復(fù)綜合征的分子遺傳學(xué)機(jī)制
        1.3 22q11.2 DS、22q11.2微重復(fù)綜合征熱點(diǎn)基因研究
        1.4 22q11.2 DS、22q11.2微重復(fù)綜合征臨床表現(xiàn)型
        1.5 22q11.2 DS、22q11.2微重復(fù)綜合征現(xiàn)有診斷技術(shù)
            1.5.1 熒光原位雜交法
            1.5.2 多重連接探針擴(kuò)增技術(shù)
            1.5.3 實(shí)時(shí)定量PCR
            1.5.4 多重PCR
            1.5.5 比較基因組雜交
        1.6 22q11.2 DS、22q11.2微重復(fù)綜合征的治療
    第二節(jié) 材料與方法
        2.1 相似序列查找及篩選
        2.2 探針、引物設(shè)計(jì)
        2.3 質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的構(gòu)建和制備
        2.4 基因組DNA樣本的收集和提取
        2.5 SS-MCA體系優(yōu)化與建立
        2.6 多片段穩(wěn)定性比較和篩選
        2.7 人工質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品考察
        2.8 體系最低檢測限的考察
        2.9 體系重復(fù)性考察
        2.10 標(biāo)本檢測
    第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        3.1 多片段穩(wěn)定性比較和篩選
        3.2 人工質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品考察
        3.3 體系最低檢測限考察
        3.4 體系重復(fù)性考察
        3.5 標(biāo)本檢測
    第四節(jié) 討論
    參考文獻(xiàn)
第三章 探針熔解曲線分析用于7q11.23微缺失綜合征和7q11.23微重復(fù)綜合征檢測的研究
    第一節(jié) 引言
        1.1 7q11.23微缺失綜合征、7q11.23微重復(fù)綜合征概述
        1.2 7q11.23微缺失綜合征、7q11.23微重復(fù)綜合征的分子生物學(xué)機(jī)制
        1.3 7q11.23微缺失綜合征、7q11.23微重復(fù)綜合征的基因研究
        1.4 7q11.23微缺失綜合征、7q11.23微重復(fù)綜合征的臨床表型
            1.4.1 語言、認(rèn)和與行為能力
            1.4.2 面部特征
            1.4.3 心血管和結(jié)締組織異常
            1.4.4 生長和內(nèi)分泌問題
            1.4.5 神經(jīng)問題
            1.4.6 其他表型
        1.5 臨床診斷評分系統(tǒng)
        1.6 診斷方法
    第二節(jié) 材料與方法
        2.1 相似序列查找及篩選
        2.2 引物和探針的設(shè)計(jì)
        2.3 質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的構(gòu)建和制備
        2.4 基因組DNA樣本的收集和提取
        2.5 SS-MCA體系優(yōu)化與建立
        2.6 多片段穩(wěn)定性比較和篩選
        2.7 人工質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品考察
        2.8 體系最低檢測限考察
        2.9 體系重復(fù)性考察
        2.10 標(biāo)本檢測
    第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        3.1 多片段穩(wěn)定性比較和篩選
        3.2 人工質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品考察
        3.3 體系最低檢測限考察
        3.4 體系重復(fù)性考察
        3.5 標(biāo)本檢測
    第四節(jié) 討論
    參考文獻(xiàn)
英文縮寫索引
致謝



本文編號：3855553