背景:急性下呼吸道感染(ALRI)是導(dǎo)致全球兒童死亡的主要原因之一,同時(shí)也是嬰幼兒住院治療的常見病因之一。其中,呼吸道合胞病毒(RSV)被認(rèn)為是導(dǎo)致全球嬰幼兒急性下呼吸道感染最常見的病原體。健康兒童感染RSV后往往經(jīng)受輕度感冒樣癥狀,但不太強(qiáng)壯的嬰兒,如早產(chǎn)兒或有先天性心臟病的嬰兒,則可能面臨嚴(yán)重疾患,需要住院治療,后果可能是致命的。成人感染RSV,通常會(huì)引起輕微的上呼吸道癥狀,但是老人及免疫缺陷者感染RSV也會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的呼吸道疾病,如哮喘、細(xì)支氣管炎、肺炎等。因此,RSV感染給社會(huì)造成了巨大的醫(yī)療和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān),快速確診病因?qū)εR床早期診斷和指導(dǎo)治療有重要意義,而病原體的檢測則是疾病確診的前提條件。重組酶介導(dǎo)的擴(kuò)增(Recombinase aided amplification,RAA)技術(shù)是在現(xiàn)有體外核酸擴(kuò)增原理的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新型的具有我國自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的等溫核酸快速檢測技術(shù)。RAA技術(shù)利用特殊的酶和蛋白在37-42℃的等溫條件下,30分鐘內(nèi)即可實(shí)現(xiàn)對目的基因片段的指數(shù)級(jí)擴(kuò)增,更快速、操作簡便、價(jià)格低廉,克服了現(xiàn)有分子檢測方法的不足。RAA擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測方式多樣,可以結(jié)合便攜式的恒...

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中英文縮略表
中文摘要
Abstract
前言
    一、研究背景
        1 呼吸道合胞病毒的病原學(xué)概述
        2 呼吸道合胞病毒的流行病學(xué)特征
        3 呼吸道合胞病毒診斷方法的研究進(jìn)展
        4 重組酶介導(dǎo)的擴(kuò)增(Recombinase aided amplification,RAA)技術(shù)概述
    二、選題目的和研究內(nèi)容
    三、技術(shù)路線
    四、研究意義
第一部分 實(shí)時(shí)熒光逆轉(zhuǎn)錄重組酶介導(dǎo)的擴(kuò)增技術(shù)檢測呼吸道合胞病毒方法的建立與初步評(píng)價(jià)
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 臨床標(biāo)本
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器和耗材
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 引物、探針的設(shè)計(jì)原則
        2.2 引物探針設(shè)計(jì)與合成
        2.3 核酸提取
        2.4 陽性質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的制備
        2.5 RAA凝膠反應(yīng)體系的建立和引物篩選
        2.6 實(shí)時(shí)熒光RT-RAA反應(yīng)體系的建立和優(yōu)化
        2.7 實(shí)時(shí)熒光RT-RAA檢測RSV的靈敏度測試
        2.8 實(shí)時(shí)熒光RT-RAA檢測RSV的特異性測試
        2.9 臨床樣本檢測
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 RAA凝膠反應(yīng)體系的建立和引物篩選
        3.2 反應(yīng)條件優(yōu)化
        3.3 實(shí)時(shí)熒光RT-RAA檢測RSV的靈敏度
        3.4 實(shí)時(shí)熒光RT-RAA檢測RSV的特異性
        3.5 臨床標(biāo)本檢測與評(píng)價(jià)
    4 討論
第二部分 逆轉(zhuǎn)錄重組酶介導(dǎo)的擴(kuò)增技術(shù)結(jié)合側(cè)流層析試紙條檢測呼吸道合胞病毒方法的建立和初步評(píng)價(jià)
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 臨床標(biāo)本
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器和耗材
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 引物、探針的設(shè)計(jì)原則
        2.2 引物探針設(shè)計(jì)與合成
        2.3 核酸提取
        2.4 RT-RAA-LFD反應(yīng)體系的建立
        2.5 RT-RAA-LFD方法檢測RSV的靈敏度測試
        2.6 RT-RAA-LFD方法檢測RSV的特異性測試
        2.7 臨床樣本檢測
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 引物和探針設(shè)計(jì)
        3.2 RT-RAA-LFD法檢測RSV的靈敏度
        3.3 RT-RAA-LFD法檢測RSV的特異性
        3.4 臨床標(biāo)本檢測與評(píng)價(jià)
    4 討論
全文總結(jié)
創(chuàng)新性
展望
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士研究生期間發(fā)表的文章
個(gè)人簡歷



本文編號(hào)：3845942