背景:急性下呼吸道感染(ALRI)是導致全球兒童死亡的主要原因之一,同時也是嬰幼兒住院治療的常見病因之一。其中,呼吸道合胞病毒(RSV)被認為是導致全球嬰幼兒急性下呼吸道感染最常見的病原體。健康兒童感染RSV后往往經(jīng)受輕度感冒樣癥狀,但不太強壯的嬰兒,如早產(chǎn)兒或有先天性心臟病的嬰兒,則可能面臨嚴重疾患,需要住院治療,后果可能是致命的。成人感染RSV,通常會引起輕微的上呼吸道癥狀,但是老人及免疫缺陷者感染RSV也會產(chǎn)生嚴重的呼吸道疾病,如哮喘、細支氣管炎、肺炎等。因此,RSV感染給社會造成了巨大的醫(yī)療和經(jīng)濟負擔,快速確診病因對臨床早期診斷和指導治療有重要意義,而病原體的檢測則是疾病確診的前提條件。重組酶介導的擴增(Recombinase aided amplification,RAA)技術是在現(xiàn)有體外核酸擴增原理的基礎上發(fā)展起來的一種新型的具有我國自主知識產(chǎn)權的等溫核酸快速檢測技術。RAA技術利用特殊的酶和蛋白在37-42℃的等溫條件下,30分鐘內即可實現(xiàn)對目的基因片段的指數(shù)級擴增,更快速、操作簡便、價格低廉,克服了現(xiàn)有分子檢測方法的不足。RAA擴增產(chǎn)物的檢測方式多樣,可以結合便攜式的恒...

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
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中文摘要
Abstract
前言
    一、研究背景
        1 呼吸道合胞病毒的病原學概述
        2 呼吸道合胞病毒的流行病學特征
        3 呼吸道合胞病毒診斷方法的研究進展
        4 重組酶介導的擴增(Recombinase aided amplification,RAA)技術概述
    二、選題目的和研究內容
    三、技術路線
    四、研究意義
第一部分 實時熒光逆轉錄重組酶介導的擴增技術檢測呼吸道合胞病毒方法的建立與初步評價
    1 實驗材料
        1.1 臨床標本
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器和耗材
    2 實驗方法
        2.1 引物、探針的設計原則
        2.2 引物探針設計與合成
        2.3 核酸提取
        2.4 陽性質粒標準品的制備
        2.5 RAA凝膠反應體系的建立和引物篩選
        2.6 實時熒光RT-RAA反應體系的建立和優(yōu)化
        2.7 實時熒光RT-RAA檢測RSV的靈敏度測試
        2.8 實時熒光RT-RAA檢測RSV的特異性測試
        2.9 臨床樣本檢測
    3 實驗結果
        3.1 RAA凝膠反應體系的建立和引物篩選
        3.2 反應條件優(yōu)化
        3.3 實時熒光RT-RAA檢測RSV的靈敏度
        3.4 實時熒光RT-RAA檢測RSV的特異性
        3.5 臨床標本檢測與評價
    4 討論
第二部分 逆轉錄重組酶介導的擴增技術結合側流層析試紙條檢測呼吸道合胞病毒方法的建立和初步評價
    1 實驗材料
        1.1 臨床標本
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器和耗材
    2 實驗方法
        2.1 引物、探針的設計原則
        2.2 引物探針設計與合成
        2.3 核酸提取
        2.4 RT-RAA-LFD反應體系的建立
        2.5 RT-RAA-LFD方法檢測RSV的靈敏度測試
        2.6 RT-RAA-LFD方法檢測RSV的特異性測試
        2.7 臨床樣本檢測
    3 實驗結果
        3.1 引物和探針設計
        3.2 RT-RAA-LFD法檢測RSV的靈敏度
        3.3 RT-RAA-LFD法檢測RSV的特異性
        3.4 臨床標本檢測與評價
    4 討論
全文總結
創(chuàng)新性
展望
參考文獻
綜述
    參考文獻
致謝
攻讀碩士研究生期間發(fā)表的文章
個人簡歷



本文編號：3845942