目的:本課題旨在探究臨床上抗真菌藥物的使用與光滑念珠菌耐藥性產(chǎn)生的關(guān)聯(lián),并分析轉(zhuǎn)錄因子PDR1的功能獲得性(gain-of-function,GOF)突變對菌株唑類耐藥性及對上皮細胞黏附能力的影響,同時闡明轉(zhuǎn)錄因子Pdr1對下游基因EPA1的調(diào)控作用。方法:收集4位患者用藥前、后配對的光滑念珠菌臨床菌株共8株,采用肉湯稀釋法檢測菌株的藥物敏感性,使用PCR技術(shù)擴增PDR1基因并對其序列進行分析,利用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測外排泵基因的表達水平,利用同源重組方法敲除目的基因,除此之外還構(gòu)建了相應(yīng)分子克隆以及進行了上皮細胞黏附試驗。結(jié)果:4株唑類敏感的菌株在經(jīng)過抗真菌治療后其PDR1基因均出現(xiàn)了GOF突變,從而獲得了對氟康唑的耐藥性,4株耐藥菌株GOF突變分別為G1099D、G346D、L344S和P927S;藥物外排泵基因CDR1和CDR2的表達上調(diào)是造成菌株耐藥的最重要原因;不同的PDR1 GOF突變會引起不同的耐藥相關(guān)基因表達譜;PDR1的G1099D和P927S突變會引起菌株對上皮細胞黏附能力增強,但該現(xiàn)象與菌株背景相關(guān);Epa1是介導(dǎo)菌株黏附的重要黏附素;Pdr1對EPA1基因...

【文章頁數(shù)】：87 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞與專業(yè)術(shù)語表
緒論
第一部分 光滑念珠菌臨床菌株藥物敏感性分析
    引言
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
第二部分 PDR1 GOF突變介導(dǎo)光滑念珠菌對唑類抗真菌藥物耐藥
    引言
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
第三部分 PDR1 GOF突變介導(dǎo)光滑念珠菌對細胞黏附能力增強
    引言
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
第四部分 轉(zhuǎn)錄因子Pdr1 調(diào)控黏附素EPA1 介導(dǎo)光滑念珠菌黏附作用
    引言
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
結(jié)論
參考文獻
致謝
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本文編號：3832720