研究背景膿毒癥(Spesis)是嚴(yán)重?zé)齻?chuàng)傷及外科大手術(shù)后常見并發(fā)癥,現(xiàn)已成為危重患者死亡的主要原因之一。臨床上由細(xì)菌感染引發(fā)的膿毒癥占到了95%以上,而細(xì)菌感染引起的內(nèi)毒素脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)的釋放是導(dǎo)致膿毒癥的主要因素。當(dāng)LPS入侵機(jī)體時(shí),首先發(fā)揮作用的便是單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng),巨噬細(xì)胞表面的Toll樣受體4識別LPS并激活巨噬細(xì)胞胞內(nèi)信號傳導(dǎo),產(chǎn)生大量的促炎性細(xì)胞因子,如TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-12等,細(xì)胞因子通過血液循環(huán)或旁分泌到達(dá)遠(yuǎn)端靶器官或靶細(xì)胞并發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng),引起全身炎癥反應(yīng),導(dǎo)致膿毒癥的發(fā)生。鑒于巨噬細(xì)胞在LPS誘發(fā)的膿毒癥的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著關(guān)鍵性的始動作用,因此,尋找并鑒定新的巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)的調(diào)控分子對于全面認(rèn)識了解膿毒癥具有重要的意義。蛋白4.1R是蛋白4.1家族的成員,此家族還包括蛋白4.1B、蛋白4.1N、蛋白4.1G。蛋白4.1家族的成員擁有4個(gè)保守的結(jié)構(gòu)域:FERM結(jié)構(gòu)域,FERM相鄰的調(diào)節(jié)結(jié)構(gòu)域、血影蛋白-肌動蛋白結(jié)合結(jié)構(gòu)域和C-末端結(jié)構(gòu)域。蛋白4.1R作為膜骨架蛋白,銜接多種跨膜蛋白與細(xì)胞骨架蛋白,...

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
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第一章 前言
    1.1 膿毒癥
    1.2 膿毒癥與促炎細(xì)胞因子
    1.3 膿毒癥與巨噬細(xì)胞
    1.4 蛋白4.1R
    1.5 研究目的與意義
    1.6 研究內(nèi)容與方法
        1.6.1 4.1 R對LPS誘導(dǎo)的膿毒癥的影響
        1.6.2 4.1 R對LPS誘導(dǎo)的膿毒癥小鼠肝損傷的影響
        1.6.3 C57BL/6小鼠骨髓來源巨噬細(xì)胞中4.1R表達(dá)的鑒定
        1.6.4 4.1 R對LPS誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)的調(diào)控作用
    1.7 技術(shù)路線
第二章 4.1R對LPS誘導(dǎo)的膿毒癥的影響
    2.1 材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動物
        2.1.2 主要藥品與試劑
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 常用試劑配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 小鼠膿毒癥模型的建立
        2.2.2 小鼠血清的制備
        2.2.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測血清中細(xì)胞因子的表達(dá)量
        2.2.4 數(shù)據(jù)分析
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 4.1 R對膿毒癥小鼠生存期的影響
        2.3.2 4.1 R對膿毒癥小鼠血清中促炎性細(xì)胞因子及趨化因子分泌的影響
    2.4 討論
第三章 4.1R對膿毒癥小鼠肝損傷的影響
    3.1 材料與方法
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)動物
        3.1.2 主要藥品與試劑
        3.1.3 主要儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 肝組織石蠟包埋、切片與H&E染色
        3.2.2 熒光定量PCR檢測膿毒癥小鼠肝組織中促炎性細(xì)胞因子的表達(dá)
        3.2.3 肝組織巨噬細(xì)胞免疫組化
        3.2.4 數(shù)據(jù)分析
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 4.1 R對膿毒癥小鼠肝組織損傷的影響
        3.3.2 4.1 R對膿毒癥小鼠肝組織促炎細(xì)胞因子及趨化因子表達(dá)的影響
        3.3.3 4.1 R對膿毒癥小鼠肝組織中巨噬細(xì)胞浸潤的影響
    3.4 討論
第四章 C57BL/6小鼠骨髓來源巨噬細(xì)胞中4.1R表達(dá)鑒定
    4.1 材料與方法
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)動物
        4.1.2 主要藥品與試劑
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        4.1.4 常用試劑的配制
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 小鼠骨髓來源的巨噬細(xì)胞的定向誘導(dǎo)
        4.2.2 流式檢測誘導(dǎo)的BMDM的純度
        4.2.3 BMDM中4.1R基因水平表達(dá)的鑒定
        4.2.4 BMDM中4.1R蛋白水平表達(dá)的鑒定
        4.2.5 BMDM中4.1R基因外顯子圖譜的繪制
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 C57BL/6小鼠骨髓來源的巨噬細(xì)胞的純度鑒定
        4.3.2 4.1 R+/+BMDM和4.1R-/-BMDM細(xì)胞中4.1R表達(dá)的鑒定
        4.3.3 C57BL/6小鼠BMDM細(xì)胞中4.1R基因的外顯子圖譜的繪制
    4.4 討論
第五章 4.1R對LPS誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)的調(diào)控作用
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.1 實(shí)驗(yàn)動物
        5.1.2 主要藥品與試劑
        5.1.3 主要儀器
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 蛋白4.1R對巨噬細(xì)胞產(chǎn)生促炎性細(xì)胞因子及趨化因子的影響
        5.2.2 Western Blotting印記檢測巨噬細(xì)胞中MAPKs通路的活化
        5.2.3 數(shù)據(jù)分析
    5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.3.1 4.1 R對LPS刺激巨噬細(xì)胞后產(chǎn)生促炎細(xì)胞因子及趨化因子的影響
        5.3.2 4.1 R對巨噬細(xì)胞中MAPKs信號通路的影響
    5.4 討論
第六章 全文討論
參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡歷、碩士期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與研究成果
致謝



本文編號：3771189