微小RNA(miRNA)是一類(lèi)典型的、小的、由內(nèi)源基因編碼的單鏈RNA分子(大約含有22個(gè)堿基),它們?cè)趧?dòng)植物中參與轉(zhuǎn)錄后基因的表達(dá)與調(diào)控,在生命體中具有十分重要的意義。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn),miRNA的異常表達(dá)與疾病的發(fā)生和發(fā)展有關(guān),它們已成為人類(lèi)早期癌癥診斷和疾病預(yù)防的新型標(biāo)志物。發(fā)展在復(fù)雜的生物環(huán)境中,高效、快速地檢測(cè)微小RNA,成為近年來(lái)科學(xué)家們的研究熱點(diǎn)。熒光的檢測(cè)手段具有響應(yīng)性高、易操作等優(yōu)點(diǎn),被廣泛應(yīng)用于生化分子(如:DNA、酶)的檢測(cè)。然而,傳統(tǒng)的熒光分子在生物體系中存在穩(wěn)定性差、易被體系中熒光蛋白干擾等缺點(diǎn),限制了它的實(shí)際應(yīng)用。為解決這一問(wèn)題,我們之前開(kāi)發(fā)了一種聚二乙炔微米管光波導(dǎo)檢測(cè)平臺(tái),用于微小RNA的響應(yīng)性檢測(cè)。它的一維波導(dǎo)結(jié)構(gòu),能夠有效避免生命體系中自體熒光的干擾。考慮到Au@PDA微米管很難在緩沖液中長(zhǎng)期儲(chǔ)存,我們將三明治雜交設(shè)計(jì)與微米管體系相結(jié)合。在該策略中,三明治結(jié)構(gòu)的形成簡(jiǎn)化了反應(yīng)及制備過(guò)程,提高反應(yīng)效率,提高檢測(cè)器的回收利用能力及穩(wěn)定性,為制備早期疾病篩查設(shè)備帶來(lái)了意義與價(jià)值。為了在復(fù)雜環(huán)境中實(shí)現(xiàn)目標(biāo)分子的痕量檢測(cè),科學(xué)家們建立了許多信號(hào)放大策略,如催化Hai...

【文章頁(yè)數(shù)】：85 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 引言
    1.2 檢測(cè)方法
        1.2.1 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)
        1.2.2 諾瑟印跡雜交(Northern blotting)
        1.2.3 miRNA微陣列技術(shù)
        1.2.4 電化學(xué)方法
        1.2.5 比色法
        1.2.6 電化學(xué)發(fā)光法
        1.2.7 熒光法
    1.3 放大方法
        1.3.1 濃縮富集法
        1.3.2 表面增強(qiáng)拉曼散射(SERS)
        1.3.3 超級(jí)三明治結(jié)構(gòu)
        1.3.4 滾環(huán)擴(kuò)增反應(yīng)(RCA)
        1.3.5 催化Hairpin探針自主裝反應(yīng)
        1.3.6 酶輔助的信號(hào)放大方法
        1.3.7 多種放大方法結(jié)合的聯(lián)級(jí)反應(yīng)
    1.4 本論文的研究目的與內(nèi)容
    參考文獻(xiàn)
第二章 構(gòu)筑微米管-DNA-金納米棒的三明治體系對(duì)miRNA-215的響應(yīng)性檢測(cè)
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)部分
        2.2.1 原料和試劑
        2.2.2 組裝氨基雙炔微米管
        2.2.3 合成probel修飾的PDA微米管
        2.2.4 合成金納米棒
        2.2.5 制備probe2修飾的金納米棒
        2.2.6 在緩沖液、血清、組織提取液中檢測(cè)目標(biāo)miRNA-215
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 構(gòu)筑雙鍵修飾的聚二乙炔微米管
        2.3.2 構(gòu)筑probe 1修飾的聚二乙炔微米管
        2.3.3 構(gòu)筑probe 2修飾的金納米棒
        2.3.4 基于聚二乙炔微米管三明治體系對(duì)miRNA-215的檢測(cè)機(jī)理
        2.3.5 金納米棒的最佳濃度
        2.3.6 濃縮富集過(guò)程
        2.3.7 基于濃縮富集效應(yīng)的三明治雜交反應(yīng)動(dòng)力學(xué)
        2.3.8 與在200μL緩沖液中反應(yīng)做對(duì)比
        2.3.9 用濃縮富集的方法檢測(cè)miRNA-215
        2.3.10 微米管檢測(cè)平臺(tái)的重復(fù)性
        2.3.11 與其他工作進(jìn)行比較
        2.3.12 微米管檢測(cè)平臺(tái)的專(zhuān)一性和選擇性
        2.3.13 微米管檢測(cè)平臺(tái)的可循環(huán)性
        2.3.14 微米管檢測(cè)平臺(tái)的穩(wěn)定性
        2.3.15 在復(fù)雜環(huán)境中微米管檢測(cè)平臺(tái)的抗干擾能力
        2.3.16 在臨床樣本中檢測(cè)miRNA-215
    2.4 本章小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第三章 構(gòu)筑異相CHA/微米管波導(dǎo)體系對(duì)miRNA-21的靈敏性檢測(cè)
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)部分
        3.2.1 原料和試劑
        3.2.2 構(gòu)筑微米管波導(dǎo)體系
        3.2.3 MiRNA-21的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 Au@PDA微米管結(jié)合CHA放大反應(yīng)的檢測(cè)機(jī)理
        3.3.2 異相CHA微米管體系與均相CHA體系作對(duì)比
        3.3.3 Au@PDA微米管檢測(cè)平臺(tái)對(duì)miRNA-21的響應(yīng)性檢測(cè)
        3.3.4 Au@PDA微米管檢測(cè)平臺(tái)的專(zhuān)一性和選擇性
        3.3.5 在血清環(huán)境中檢測(cè)miRNA-21
        3.3.6 在癌癥病人的血清樣本中檢測(cè)miRNA-21
    3.4 本章小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第四章 論文總結(jié)與展望
    4.1 總結(jié)
    4.2 展望
致謝
在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及取得的研究成果



本文編號(hào)：3756838