目的感染在流行病學(xué)上與多種造血干細(xì)胞(Hematopoietic stem cell,HSC)功能障礙癥相關(guān),如急性髓性白血病、骨髓增生異常綜合征、再生障礙性貧血等。臨床上治療以上血液疾病通常采用HSC移植。從疾病發(fā)生機(jī)制的角度全面揭示炎癥對HSC的影響對治療各種血液病具有重要意義。EDAG(Erythroid Differentiation Associated Gene)是一種造血組織和細(xì)胞特異性表達(dá)的基因,在調(diào)控HSC增殖、分化和維持HSC譜系平衡中發(fā)揮重要作用。Hemgn是EDAG在小鼠中的同源基因,本研究利用Hemgn基因敲除(Hemgn^-/-)小鼠,通過建立單核細(xì)胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)急性感染和反復(fù)感染模型,初步探討了Hemgn在LM誘導(dǎo)的炎癥中對HSC及免疫系統(tǒng)的影響。方法采用腹腔注射建立單核細(xì)胞增生李斯特菌急性感染和反復(fù)感染模型,通過蛋白質(zhì)免疫印跡法(western blot,WB)檢測野生型小鼠骨髓Hemgn表達(dá);利用流式細(xì)胞術(shù)分析小鼠造血干祖細(xì)胞(Hematopoietic stem/progeni...

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 導(dǎo)論
    1.1 研究背景
    1.2 文獻(xiàn)綜述
        1.2.1 EDAG與造血
        1.2.2 IFNγ對造血干細(xì)胞的影響
        1.2.3 單核細(xì)胞增生李斯特菌與免疫反應(yīng)
    1.3 研究方法
    1.4 研究內(nèi)容
第二章 Hemgn調(diào)節(jié)造血干細(xì)胞應(yīng)對單增李斯特菌感染
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 主要儀器設(shè)備
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 凍干菌株的恢復(fù)培養(yǎng)
        2.2.2 菌液的復(fù)蘇與鑒定
        2.2.3 單核細(xì)胞增生李斯特菌的培養(yǎng)與計(jì)數(shù)
        2.2.4 建立單核細(xì)胞增生李斯特菌單次感染模型
        2.2.5 外周血血象分析
        2.2.6 酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法檢測血清IFNγ水平
        2.2.7 骨髓單個(gè)核細(xì)胞懸液的制備
        2.2.8 脾臟單個(gè)核細(xì)胞懸液的制備
        2.2.9 細(xì)胞計(jì)數(shù)
        2.2.10 HSPC分析
        2.2.11 細(xì)胞周期分析
        2.2.12 活性氧水平檢測
        2.2.13 小鼠骨髓細(xì)胞集落形成能力
        2.2.14 Western Blot檢測
        2.2.15 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 建立單核細(xì)胞增生李斯特菌單次感染模型
        2.3.2 感染單核細(xì)胞增生李斯特菌后小鼠骨髓中Hemgn表達(dá)上調(diào)
        2.3.3 Hemgn^-/-小鼠單次感染單核細(xì)胞增生李斯特菌后造血干細(xì)胞功能下降
        2.3.4 Hemgn^-/-小鼠反復(fù)感染單核細(xì)胞增生李斯特菌后造血干細(xì)胞耗竭
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第三章 Hemgn敲除導(dǎo)致單核細(xì)胞增生李斯特菌感染后免疫系統(tǒng)紊亂
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 主要儀器設(shè)備
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 建立單核細(xì)胞增生李斯特菌急性感染模型
        3.2.2 外周血血象分析
        3.2.3 脾臟、肝臟荷菌量檢測
        3.2.4 病理學(xué)檢測
        3.2.5 Cytometic Bead Array(CBA)法檢測脾臟、肝臟中細(xì)胞因子水平
        3.2.6 免疫細(xì)胞分析
        3.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 Hemgn^-/-小鼠對單核細(xì)胞增生李斯特菌急性感染更加敏感
        3.3.2 Hemgn^-/-小鼠感染單核細(xì)胞增生李斯特菌后組織荷菌量增加
        3.3.3 Hemgn^-/-小鼠感染單核細(xì)胞增生李斯特菌后病理損傷嚴(yán)重
        3.3.4 Hemgn^-/-小鼠脾臟各炎癥因子釋放減少
        3.3.5 Hemgn^-/-小鼠脾臟中粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞無差異
        3.3.6 Hemgn^-/-小鼠脾臟中B淋巴細(xì)胞無差異
        3.3.7 Hemgn^-/-小鼠脾臟中DC細(xì)胞比例降低
        3.3.8 Hemgn^-/-小鼠脾臟中NK細(xì)胞比例顯著降低
        3.3.9 敲除Hemgn對 T淋巴細(xì)胞有顯著抑制作用
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第四章 結(jié)論與展望
    4.1 結(jié)論
    4.2 展望
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文



本文編號(hào)：3754611