近年來,我國患有心肌損傷的人群數(shù)量呈上升發(fā)展趨勢,人可溶性生長刺激表達(dá)基因2蛋白(ST2)作為一種新型的心肌損傷標(biāo)志物,對于檢測急性心肌梗死(AMI)和心力衰竭(HF)患者的治療后效果具有重要的引導(dǎo)和應(yīng)用意義,研究ST2蛋白的多種免疫檢測方法為臨床應(yīng)用和試劑盒的開發(fā)提供實(shí)驗(yàn)室基礎(chǔ)。本文經(jīng)設(shè)計(jì)合成表達(dá)載體pET-15b-ST2,轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21(DE3)中進(jìn)行表達(dá)。具體表達(dá)條件選擇使用1mM IPTG,在16℃,110 rpm條件下誘導(dǎo)24 h。純化后獲得純度高達(dá)95%以上,濃度為6.25 mg/ml的可溶性ST2蛋白。本研究構(gòu)建ST2蛋白的酶聯(lián)免疫檢測、基于磁性微球的化學(xué)發(fā)光檢測、膠體金檢測等方法。通過對實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行一系列優(yōu)化后,建立最佳工藝。本文建立的酶聯(lián)免疫方法與市售ELISA方法進(jìn)行了方法學(xué)對比,一致性較好,并應(yīng)用于檢測臨床樣本血清可溶性ST2,效果較好。

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 ST2蛋白簡介
    1.2 ST2與AMI和HF的研究
    1.3 ELISA免疫檢測方法
    1.4 化學(xué)發(fā)光免疫檢測技術(shù)
    1.5 膠體金免疫層析檢測方法
    1.6 本課題的研究目的及意義
第二章 ST2表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    2.4 小結(jié)
第三章 ST2蛋白在大腸桿菌中的表達(dá)及純化
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
    3.2 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.4 小結(jié)
第四章 ST2 ELISA免疫檢測方法的建立
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
    4.2 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.4 小結(jié)
第五章 ST2基于磁性微球的化學(xué)發(fā)光免疫檢測方法的建立
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
    5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    5.4 小結(jié)
第六章 ST2膠體金免疫層析檢測方法的建立
    6.1 實(shí)驗(yàn)材料
    6.2 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
    6.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    6.4 小結(jié)
第七章 結(jié)論與展望
    7.1 結(jié)論
    7.2 展望
致謝
參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：3742733