目的:骨髓移植是目前許多血液系統(tǒng)疾病唯一可治愈的治療策略,但如何在體外有效擴(kuò)增數(shù)量有限的造血干細(xì)胞（HSC）仍然是當(dāng)今的研究熱點(diǎn)及難點(diǎn),近年來(lái)的研究已經(jīng)證實(shí)了Notch信號(hào)和內(nèi)皮細(xì)胞（ECs）在維持HSC池穩(wěn)態(tài)和再生中的重要作用,同時(shí)我們之前的研究已表明在體外培養(yǎng)中ECs可促進(jìn)HSCs增殖。本試驗(yàn)將更深入地探討ECs促進(jìn)HSCs增殖是否和Notch信號(hào)相關(guān),為體外有效擴(kuò)增HSCs的深入研究提供理論依據(jù)。方法:（1）通過(guò)膠原酶消化分離小鼠肺組織,獲得的細(xì)胞采用EC培養(yǎng)基培養(yǎng),同時(shí)觀察細(xì)胞的形態(tài),通過(guò)免疫熒光染色和流式細(xì)胞術(shù)鑒定ECs的特性及純度,當(dāng)細(xì)胞融合至80%左右進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng)和共培養(yǎng)。（2）取得的小鼠骨髓通過(guò)密度梯度離心法以得到單個(gè)核細(xì)胞（MNC）,采用免疫磁珠分選儀分選出CD117+HSC細(xì)胞,采取流式細(xì)胞儀測(cè)定CD117陽(yáng)性細(xì)胞的純度及HSC CD117CD34的共表達(dá)率。（3）將HSC接種到含或未含ECs的培養(yǎng)基中,分為EC單獨(dú)培養(yǎng)組、EC+HSC共培養(yǎng)組、HSC單獨(dú)培養(yǎng)組,每組設(shè)置3個(gè)復(fù)孔,我們前期的研究發(fā)現(xiàn)ECs促進(jìn)HSC增殖于第4天作用最明顯,于第7天HSC峰值最高,... 

【文章頁(yè)數(shù)】：81 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞的分離培養(yǎng)及生物學(xué)特性的鑒定
    試驗(yàn)流程
    材料與試劑
    實(shí)驗(yàn)方法
    實(shí)驗(yàn)結(jié)果
第二部分 小鼠CD117+HSC的分選及鑒定
    試驗(yàn)流程
    材料與試劑
    實(shí)驗(yàn)方法
    實(shí)驗(yàn)結(jié)果
第三部分 Notch信號(hào)在肺微血管EC與HSC共培養(yǎng)后的改變
    實(shí)驗(yàn)流程
    材料與試劑
    實(shí)驗(yàn)方法
    實(shí)驗(yàn)結(jié)果
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
英文縮略詞對(duì)照表
致謝
Notch信號(hào)對(duì)造血干細(xì)胞的調(diào)控作用(綜述)
    參考文獻(xiàn)


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Notch信號(hào)介導(dǎo)共培養(yǎng)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和造血干細(xì)胞的相互作用[J]. 石蕊,徐曼,蘇永峰,張斌,陳虎.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2012(08)

碩士論文
[1]不同來(lái)源微血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)方法的建立及生物學(xué)特性比較[D]. 楊敏.西南醫(yī)科大學(xué) 2017
[2]微血管內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)造血干細(xì)胞增殖的研究[D]. 錢怡.西南醫(yī)科大學(xué) 2017
[3]關(guān)于Shh協(xié)同骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞促進(jìn)造血干細(xì)胞增殖機(jī)制的研究[D]. 郭靜.西南醫(yī)科大學(xué) 2016
[4]研究BMP-2對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞促進(jìn)造血干細(xì)胞增殖的影響[D]. 李書壇.四川醫(yī)科大學(xué) 2015



本文編號(hào)：3689782