發(fā)布時(shí)間：2022-08-10 09:20

　　阿爾茨海默病（AD）被視為影響老年人健康的第三健康“殺手”。目前,臨床上已涌現(xiàn)出大量的AD診斷方法,主要包括神經(jīng)影像學(xué)檢測(cè)和腦脊髓液分析兩種診斷方法。然而,現(xiàn)存的AD診斷方法存在著許多不足。例如,檢測(cè)方法的準(zhǔn)確度低和特異性差會(huì)導(dǎo)致“假陰性”判斷;檢測(cè)的靈敏度低會(huì)使AD無法被早期發(fā)現(xiàn),以致錯(cuò)過最佳的治療時(shí)期。為了實(shí)現(xiàn)AD的早期診斷,本文基于熵驅(qū)動(dòng)鏈置換反應(yīng)（ESDR）原理,結(jié)合氧化石墨烯（GO）、發(fā)夾狀探針（H）以及熒光基團(tuán)FAM修飾的替換鏈探針（R1和R2）,設(shè)計(jì)了一個(gè)新型的熒光信號(hào)放大檢測(cè)系統(tǒng),對(duì)外泌體中的AD生物標(biāo)志物—Aβ42寡聚體進(jìn)行特異性檢測(cè)。在該檢測(cè)系統(tǒng)中,Aβ42寡聚體先與H特異性結(jié)合并將H的發(fā)夾結(jié)構(gòu)打開,打開的H與R1、R2通過堿基互補(bǔ)配對(duì)原則形成雙鏈DNA;此時(shí),與H結(jié)合的Aβ42寡聚體被替換下來以引發(fā)下一個(gè)周期的識(shí)別反應(yīng),循環(huán)不斷地反應(yīng)使熒光信號(hào)得到放大。GO作為熒光淬滅劑可以吸附游離的R1、R2（單鏈DNA）并淬滅它們的熒光;但GO不能吸附雙鏈DNA,雙鏈DNA上的熒光不受GO影響。因此,Aβ42寡聚體的濃度可根據(jù)檢測(cè)樣品熒光信號(hào)強(qiáng)度的變化進(jìn)行計(jì)算。此外,由于外泌... 

【文章頁(yè)數(shù)】：66 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1 阿爾茨海默癥的概述
        1.1 阿爾茨海默癥的發(fā)展現(xiàn)狀
        1.2 阿爾茨海默癥的臨床診斷方法及存在問題
        1.3 阿爾茨海默癥的發(fā)病機(jī)制
    2 生物標(biāo)志物Aβ42寡聚體的檢測(cè)
    3 外泌體的概述
        3.1 外泌體的產(chǎn)生
        3.2 外泌體作為疾病診斷工具的優(yōu)勢(shì)
        3.3 外泌體用于阿爾茨海默癥的早期診斷
    4 ESDR信號(hào)放大檢測(cè)方法
        4.1 核酸適配體用于生物檢測(cè)的巨大優(yōu)勢(shì)
        4.2 適配體熒光探針參與的信號(hào)放大檢測(cè)方法及存在問題
    5 淬滅劑氧化石墨烯的應(yīng)用
    6 本課題的設(shè)計(jì)思路與研究意義
第二章 Aβ42寡聚體ESDR信號(hào)放大檢測(cè)方法的構(gòu)建
    1 儀器與試劑
        1.1 試劑
        1.2 儀器
        1.3 溶液的配制
    2 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
        2.1 樣品預(yù)處理
            2.1.1 Aβ42及Aβ40寡聚體的制備
            2.1.2 Aβ42寡聚體的SDS-PAGE電泳表征
            2.1.3 發(fā)夾探針和替換鏈探針的處理
        2.2 實(shí)驗(yàn)步驟
        2.3 檢測(cè)系統(tǒng)可行性考察
        2.4 檢測(cè)系統(tǒng)的條件優(yōu)化
            2.4.1 發(fā)夾探針及替換鏈探針的設(shè)計(jì)與結(jié)構(gòu)優(yōu)化
            2.4.2 氧化石墨烯濃度
            2.4.3 氧化石墨烯孵育時(shí)間
            2.4.4 鏈置換時(shí)間
        2.5 方法學(xué)驗(yàn)證
            2.5.1 特異性
            2.5.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線
            2.5.3 精密度
            2.5.4 準(zhǔn)確度
    3 結(jié)果與討論
        3.1 Aβ42寡聚體的SDS-PAGE電泳分析
        3.2 檢測(cè)系統(tǒng)可行性分析
        3.3 檢測(cè)系統(tǒng)的條件優(yōu)化
            3.3.1 發(fā)夾探針及替換鏈探針的設(shè)計(jì)及結(jié)構(gòu)優(yōu)化
            3.3.2 氧化石墨烯濃度
            3.3.3 氧化石墨烯孵育時(shí)間
            3.3.4 鏈置換時(shí)間
        3.4 方法學(xué)驗(yàn)證
            3.4.1 特異性
            3.4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線
            3.4.3 精密度
            3.4.4 準(zhǔn)確度
    4 本章小結(jié)
第三章 模擬血清中Aβ42寡聚體的檢測(cè)
    1 試劑與儀器
        1.1 試劑
        1.2 儀器
    2 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
        2.1 樣品預(yù)處理
        2.2 實(shí)驗(yàn)步驟
        2.3 模擬血清中Aβ42寡聚體檢測(cè)的方法學(xué)
            2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線
            2.3.2 精密度
            2.3.3 準(zhǔn)確度
    3 結(jié)果與討論
        3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線
        3.2 精密度
        3.3 準(zhǔn)確度
    4 本章小結(jié)
第四章 外泌體中Aβ42寡聚體的檢測(cè)
    1 試劑與儀器
        1.1 試劑
        1.2 儀器
    2 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
        2.1 樣品預(yù)處理
            2.1.1 鼠血清的提取
            2.1.2 血清外泌體的提取
            2.1.3 阿爾茨海默癥患者外泌體的模擬
        2.2 實(shí)驗(yàn)步驟
            2.2.1 外泌體及外泌體-Aβ42寡聚體的表征
            2.2.2 Exo-Aβ42中Aβ42寡聚體的提取與檢測(cè)
    3 結(jié)果與討論
        3.1 阿爾茨海默癥患者外泌體的模擬
        3.2 外泌體及Exo-Aβ42的表征
        3.3 Exo-Aβ42中Aβ42寡聚體的提取與檢測(cè)
    4 本章小結(jié)
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷


【參考文獻(xiàn)】：
碩士論文
[1]β-淀粉樣蛋白42核酸適配體的篩選及其性質(zhì)的考察[D]. 王沛.湖南大學(xué) 2014



本文編號(hào)：3673378