志賀菌性痢疾是全球面臨的重要公共衛(wèi)生問題,尤其是發(fā)展中國家的重要傳染病之一。其病原體志賀菌屬是一類具有高度傳染性、危害較嚴重的革蘭陰性腸道致病菌,且其不斷增加的耐藥性問題為志賀菌性痢疾的有效治療增加困難。而耐藥基因的水平轉(zhuǎn)移作為細菌獲得性耐藥的一個重要方式已引起廣泛關(guān)注。近年來人們發(fā)現(xiàn)成簇的規(guī)律間隔短回文重復序列（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats, CRISPRs）與其相關(guān)基因序列（CRISPR-associated, cas）編碼的Cas蛋白組成的CRISPR/Cas系統(tǒng)作為原核生物的獲得性和可遺傳性的新型微生物防御系統(tǒng),廣泛存在于古細菌和細菌基因組中,可以有效抵抗噬菌體感染及質(zhì)粒接合轉(zhuǎn)移,限制外源性遺傳物質(zhì)的水平轉(zhuǎn)移。這或許可以為解決細菌耐藥性的傳播提供幫助和新思路。但是目前CRISPR/Cas系統(tǒng)與細菌耐藥關(guān)系的研究不多且未達成統(tǒng)一結(jié)論,機制尚不清楚。目的基于本課題組前期的研究進展,進一步研究志賀菌耐藥與CRISPR/Cas系統(tǒng)的關(guān)系。方法1.采用瓊脂稀釋法測定志賀菌最低抑菌濃度（MIC）。2.應用... 

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞
1 引言
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 菌株及質(zhì)粒來源
        2.1.2 主要試劑及生產(chǎn)廠家
        2.1.3 主要試劑配方
        2.1.4 引物及序列合成
        2.1.5 實驗器材
        2.1.6 間隔序列來源
        2.1.7 志賀菌及其間隔序列同源質(zhì)�；蚴删w的耐藥基因的相關(guān)性研究中耐藥基因的選擇
        2.1.8 生物信息學軟件
        2.1.9 網(wǎng)絡服務器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 志賀菌的復蘇與鑒定
        2.2.2 細菌濁度的測定
        2.2.3 分光光度法測細菌濃度
        2.2.4 瓊脂稀釋法測定志賀菌的抗生素最低抑菌濃度(MIC)
        2.2.5 耐藥質(zhì)粒電轉(zhuǎn)化入敏感志賀菌
        2.2.6 氯霉素誘導敏感志賀菌耐藥
        2.2.7 多耐藥志賀菌無抗生素壓力傳代
        2.2.8 志賀菌基因組DNA的提取
        2.2.9 PCR擴增和凝膠電泳
        2.2.10 志賀菌及其spacer同源質(zhì)�；蚴删w的耐藥信息的獲得
    2.3 研究技術(shù)路線
3 結(jié)果
    3.1 電轉(zhuǎn)化敏感志賀菌耐藥的變化
        3.1.1 電轉(zhuǎn)化敏感志賀菌耐藥后耐藥表型變化
        3.1.2 電轉(zhuǎn)化敏感志賀菌耐藥后志賀菌CRISPR/Cas系統(tǒng)的變化
    3.2 氯霉素誘導敏感志賀菌耐藥前后CRISPR/Cas系統(tǒng)的變化
        3.2.1 耐藥表型(氯霉素)的變化
        3.2.2 交叉耐藥的檢測
        3.2.3 CRISPR/Cas系統(tǒng)的變化
    3.3 多耐藥志賀菌無抗生素壓力傳代前后CRISPR/Cas系統(tǒng)的變化
        3.3.1 耐藥表型的變化
        3.3.2 CRISPR/Cas系統(tǒng)的變化
    3.4 志賀菌間隔序列同源質(zhì)粒的耐藥信息與其耐藥的關(guān)系
        3.4.1 間隔序列的同源質(zhì)粒及間隔序列所在菌株的信息
        3.4.2 耐藥基因信息
        3.4.3 耐藥相關(guān)信息
        3.4.4 其他相關(guān)信息
4 討論
    4.1 電轉(zhuǎn)化敏感志賀菌耐藥前后CRISPR/Cas系統(tǒng)的變化
    4.2 氯霉素誘導敏感志賀菌耐藥前后CRISPR/Cas系統(tǒng)的變化
    4.3 多耐藥志賀菌無抗生素壓力傳代前后CRISPR/Cas系統(tǒng)的變化
    4.4 志賀菌間隔序列同源質(zhì)粒的耐藥信息與其耐藥的關(guān)系
5 結(jié)論
參考文獻
附錄
綜述 CRISPR/Cas系統(tǒng)與細菌耐藥關(guān)系的研究概況
    1 CRISPR/Cas系統(tǒng)
        1.1 CRISPR/Cas系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)與分類
        1.2 CRISPR/Cas系統(tǒng)的作用機制
            1.2.1 適應性階段
            1.2.2 crRNAs/Cas核糖核蛋白復合物形成階段
            1.2.3 靶向定位與裂解階段
    2 基因的水平轉(zhuǎn)移與細菌耐藥
        2.1 質(zhì)粒介導的耐藥基因水平轉(zhuǎn)移
        2.2 噬菌體與細菌耐藥
        2.3 轉(zhuǎn)座子與細菌耐藥
        2.4 整合子與細菌耐藥
        2.5 插入序列共同區(qū)與細菌耐藥
    3 CRISPR/Cas系統(tǒng)與細菌耐藥
結(jié)語
參考文獻
個人簡歷
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]噬菌體:一個世紀的歷史回顧[J]. 李升偉,弗瑞斯特·羅韋爾,安卡·M·西格爾.  世界科學. 2016(01)
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[3]大腸桿菌多重耐藥株的體外誘導初步研究[J]. 嚴亮.  畜牧與飼料科學. 2015(04)
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[7]細菌耐藥機制的國內(nèi)外最新研究進展[J]. 丁元廷.  現(xiàn)代預防醫(yī)學. 2013(06)
[8]轉(zhuǎn)座子介導的細菌耐藥機制相關(guān)研究進展[J]. 嚴俊,黃永茂.  西南軍醫(yī). 2013(01)
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博士論文
[1]ISEcpl介導志賀菌耐藥的分子基礎研究[D]. 王穎芳.鄭州大學 2013

碩士論文
[1]志賀菌、大腸桿菌和沙門菌CRISPR結(jié)構(gòu)特征生物信息學分析[D]. 王鵬飛.鄭州大學 2015
[2]CRISPR/Cas系統(tǒng)與志賀菌耐藥的關(guān)系[D]. 王琳琳.鄭州大學 2015
[3]糞腸球菌可移動元件介導的耐藥性與CRISPR的關(guān)系探索[D]. 蔣偉.湖南農(nóng)業(yè)大學 2012
[4]志賀菌屬細菌耐藥相關(guān)質(zhì)粒的耐藥性研究[D]. 侯瑞娟.鄭州大學 2012



本文編號：3660340