目的:克隆和表達(dá)結(jié)核分枝桿菌（MTB）磷酸鹽特異性轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)蛋白1（PstS1）,分析其免疫學(xué)活性,評(píng)價(jià)其診斷結(jié)核病的價(jià)值。方法:根據(jù)Genbank中報(bào)道的MTB H37Rv株P(guān)stS1基因序列設(shè)計(jì)引物,PCR擴(kuò)增目的基因,與克隆載體pMD18-T連接,轉(zhuǎn)化至宿主菌E.coli JM109,菌落PCR和質(zhì)粒DNA測(cè)序鑒定陽(yáng)性克隆。將雙酶切的PstS1基因與表達(dá)載體pET-28a（+）連接,轉(zhuǎn)化至宿主菌E.coli JM109,篩選陽(yáng)性重組子,提取pET-28a（+）-PstS1重組表達(dá)質(zhì)粒,經(jīng)PCR和雙酶切鑒定后,轉(zhuǎn)化至宿主菌E.coli BL21（DE3）;IPTG誘導(dǎo)表達(dá),SDS-PAGE鑒定表達(dá)產(chǎn)物。親和層析純化PstS1,Western-blot鑒定其反應(yīng)原性。棋盤(pán)滴定法確定PstS1與病人血清反應(yīng)的最適濃度。以PstS1作為診斷抗原,ELISA檢測(cè)結(jié)核病患者血清抗體,評(píng)價(jià)其診斷價(jià)值。結(jié)果:PCR擴(kuò)增得到PstS1基因,大小約1120bp,經(jīng)DNA測(cè)序鑒定其與MTB標(biāo)準(zhǔn)菌株P(guān)stS1基因序列一致。成功構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pET-28a（+）-PstS1,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)得到PstS... 

【文章頁(yè)數(shù)】：57 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
1.引言
2.材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 菌株及血清
        2.1.2 主要儀器
        2.1.3 主要試劑與耗材
        2.1.4 主要溶液的配制
    2.2 方法
        2.2.1 標(biāo)本資料收集
        2.2.2 PstS1 基因的擴(kuò)增
        2.2.3 PstS1 基因的克隆與鑒定
        2.2.4 重組PstS1 表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.5 重組PstS1 的誘導(dǎo)表達(dá)與鑒定
        2.2.6 重組PstS1 的純化
        2.2.7 重組PstS1 的含量測(cè)定
        2.2.8 Western blot鑒定重組PstS1 的反應(yīng)原性
        2.2.9 棋盤(pán)滴定法確定最適抗原-抗體反應(yīng)濃度
        2.2.10 PstS1-ELISA法檢測(cè)病人血清抗體
3.結(jié)果
    3.1 一般資料比較
    3.2 PstS1 基因的擴(kuò)增
    3.3 PstS1 基因的克隆與鑒定
    3.4 重組PstS1 基因表達(dá)載體的構(gòu)建
    3.5 重組PstS1 的表達(dá)與純化
    3.6 重組PstS1 的反應(yīng)原性分析
    3.7 重組PstS1 的含量測(cè)定
    3.8 棋盤(pán)滴定法確定最適抗原-抗體反應(yīng)濃度
    3.9 PstS1-ELISA法檢測(cè)病人血清抗體
4.討論
5.結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
附錄1: 中英文縮略詞
附錄2：在校期間發(fā)表論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3651423