病原體核酸檢測(cè)新技術(shù)的建立及應(yīng)用
發(fā)布時(shí)間：2022-01-03 09:14
感染性疾病通常由病原微生物感染引起,并嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康。隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)的迅速發(fā)展,人們的生活方式也發(fā)生了較大的變化,這給我國(guó)傳染病防治工作帶來(lái)了新的問(wèn)題和挑戰(zhàn)。可靠而有效的病原體診斷方法是防治與控制傳染病的重要工具。傳統(tǒng)的病原微生物檢驗(yàn)方法經(jīng)常有靈敏度不高或特異性較低等問(wèn)題,這使它們?cè)谠\斷低濃度樣本,混合感染或不明原因感染時(shí)顯示出局限性。隨著分子生物學(xué)與基因組學(xué)的不斷發(fā)展,各種分子診斷技術(shù)與核酸檢測(cè)方法逐漸成為公共衛(wèi)生與臨床檢驗(yàn)領(lǐng)域的重要工具,特別是在感染性疾病診斷、傳染病預(yù)防控制,癥候群監(jiān)測(cè)、不明原因感染病原體診斷以及微生物基因組學(xué)研究等工作中成為主流方法。近年來(lái),聚合酶鏈反應(yīng)和核酸分子雜交等分子生物學(xué)技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于病原生物學(xué)的診斷中,更為先進(jìn)的基因芯片技術(shù)和高通量測(cè)序技術(shù)也處于快速發(fā)展階段。單一的一種核酸檢測(cè)方法很難滿(mǎn)足不同的實(shí)驗(yàn)與臨床需求,如何充分利用不同分子診斷技術(shù)的優(yōu)勢(shì)開(kāi)展病原體的檢測(cè)和監(jiān)測(cè)研究日益為人們所關(guān)注。在這種需求下,本研究建立了一系列病原體核酸檢測(cè)新技術(shù),以期在不同情況下應(yīng)用不同的檢測(cè)方法和策略,以最快速,經(jīng)濟(jì),準(zhǔn)確和科學(xué)的方式解決相應(yīng)的科學(xué)問(wèn)題。論文中描述了若干...
【文章來(lái)源】：中國(guó)疾病預(yù)防控制中心北京市
【文章頁(yè)數(shù)】：155 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【部分圖文】：
圖１－１各種核酸檢測(cè)方法適用于應(yīng)對(duì)不同的檢測(cè)任務(wù)藍(lán)色：低通量方法；紅色：??高通量方法；淺色：一般適用；深色：非常適用
??（２）通過(guò)延伸或重新設(shè)計(jì)外引物以增加其Ｔｍ?（?ｍｅｌｔｉｎｇ?ｔｅｍｐｅｒａｔｕ丨＇ｅ）值，再通??過(guò)調(diào)節(jié)退火溫度控制兩個(gè)階段的ＰＣＲ的進(jìn)行與否（圖２－２）。但該策略依??賴(lài)超長(zhǎng)的外引物，不僅難以設(shè)計(jì)而且引物性能也難以保證，限制了其在病??１９??
?■?Ｉｎｎｅｒ?ｐｒｉｍｅｒ??ｗ?．?Ｗ??圖２－１以物理隔絕策略實(shí)現(xiàn)ＯＳＮ－ＰＣＲ?Ａ．帶有痕ｌｉｔ溴酚藍(lán)的內(nèi)引物固定在管蓋??內(nèi)壁。首輪ＰＣＲ結(jié)束后不開(kāi)蓋，把整個(gè)反應(yīng)管反復(fù)顛倒混勻，讓內(nèi)引物溶解在??反應(yīng)體系中，然后放回到ＰＣＲ儀進(jìn)行第二輪擴(kuò)增。Ｂ．首輪反應(yīng)之后將ＰＣＲ管離心，??細(xì)管中的內(nèi)引物溶液通過(guò)下端的開(kāi)口注入反應(yīng)體系中，然后放回到ＰＣＲ儀進(jìn)行第??二輪擴(kuò)增。??（２）通過(guò)延伸或重新設(shè)計(jì)外引物以增加其Ｔｍ?（?ｍｅｌｔｉｎｇ?ｔｅｍｐｅｒａｔｕ丨＇ｅ）值，再通??過(guò)調(diào)節(jié)退火溫度控制兩個(gè)階段的ＰＣＲ的進(jìn)行與否（圖２－２）。但該策略依??賴(lài)超長(zhǎng)的外引物，不僅難以設(shè)計(jì)而且引物性能也難以保證，限制了其在病??１９??
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Rapid and Accurate Sequencing of Enterovirus Genomes Using MinION Nanopore Sequencer[J]. WANG Ji,KE Yue Hua,ZHANG Yong,HUANG Ke Qiang,WANG Lei,SHEN Xin Xin,DONG Xiao Ping,XU Wen Bo,MA Xue Jun. Biomedical and Environmental Sciences. 2017(10)
[2]Oxford Nanopore MinION Sequencing and Genome Assembly[J]. Hengyun Lu,Francesca Giordano,Zemin Ning. Genomics,Proteomics & Bioinformatics. 2016(05)
[3]Nanopore-based Fourth-generation DNA Sequencing Technology[J]. Yanxiao Feng,Yuechuan Zhang,Cuifeng Ying,Deqiang Wang,Chunlei Du. Genomics,Proteomics & Bioinformatics. 2015(01)
本文編號(hào)：3566003
【文章來(lái)源】：中國(guó)疾病預(yù)防控制中心北京市
【文章頁(yè)數(shù)】：155 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【部分圖文】：
圖１－１各種核酸檢測(cè)方法適用于應(yīng)對(duì)不同的檢測(cè)任務(wù)藍(lán)色：低通量方法；紅色：??高通量方法；淺色：一般適用；深色：非常適用
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【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Rapid and Accurate Sequencing of Enterovirus Genomes Using MinION Nanopore Sequencer[J]. WANG Ji,KE Yue Hua,ZHANG Yong,HUANG Ke Qiang,WANG Lei,SHEN Xin Xin,DONG Xiao Ping,XU Wen Bo,MA Xue Jun. Biomedical and Environmental Sciences. 2017(10)
[2]Oxford Nanopore MinION Sequencing and Genome Assembly[J]. Hengyun Lu,Francesca Giordano,Zemin Ning. Genomics,Proteomics & Bioinformatics. 2016(05)
[3]Nanopore-based Fourth-generation DNA Sequencing Technology[J]. Yanxiao Feng,Yuechuan Zhang,Cuifeng Ying,Deqiang Wang,Chunlei Du. Genomics,Proteomics & Bioinformatics. 2015(01)
本文編號(hào)：3566003
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