目的:研究嗜鉻粒蛋白A（chromogranin A,CGA）衍生多肽CGA47-66（chromofungin,CHR）對(duì)脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）誘導(dǎo)膿毒癥小鼠肺損傷的影響,并探討CHR對(duì)肺組織自噬流的調(diào)節(jié)作用。方法:通過LPS（10 mg/kg）腹腔注射構(gòu)建膿毒癥肺損傷小鼠模型,分組依次為正常對(duì)照組（Control組）、LPS處理組（LPS組）、低劑量CHR預(yù)處理組（CHRL組,CHRL=15.5μg/kg）、高劑量CHR預(yù)處理組（CHRH組,CHRH=77.5μg/kg）。LPS腹腔注射6 h后留取肺組織標(biāo)本,檢測(cè)肺組織含水量及EB滲漏情況;HE染色切片觀察肺組織病理變化;Western blot分別檢測(cè)各組肺組織中自噬標(biāo)志性蛋白LC3BⅡ和底物蛋白P62的表達(dá);免疫熒光進(jìn)一步觀察各組肺組織中LC3B與P62的熒光強(qiáng)度表達(dá)情況。結(jié)果:與正常對(duì)照組相比,LPS組肺組織濕/干比值（5.093±0.275 vs. 4.456±0.252,P=0.000）和EB含量（1.839±0.212 vs. 1.163±0.199,P=0.000）明顯增高,而CHRH... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2020,45(06)北大核心CSCD

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CHR對(duì)LPS誘導(dǎo)膿毒癥小鼠肺組織自噬相關(guān)蛋白表達(dá)水平的影響（±s,n=3)

圖2 CHR對(duì)LPS誘導(dǎo)膿毒癥小鼠肺組織自噬相關(guān)蛋白表達(dá)水平的影響（±s,n=3)最近的研究表明，自噬參與了凋亡與炎癥反應(yīng)的調(diào)控，在膿毒癥誘發(fā)急性肺損傷過程中發(fā)揮保護(hù)性作用。自噬是細(xì)胞在自噬相關(guān)基因（autophagy-related genes,Atg）的調(diào)控下利用溶酶體降解自身受損細(xì)胞器和大分子物質(zhì)的過程，主要由以下4個(gè)步驟組成：(1)吞噬小泡的形成；(2)自噬體的形成；(3)自噬溶酶體的形成；(4)包裹物的降解。自噬流是一個(gè)動(dòng)態(tài)連續(xù)的過程，涵蓋以上4個(gè)步驟的整個(gè)進(jìn)程。如果自噬流中任一環(huán)節(jié)出現(xiàn)障礙，自噬將無法發(fā)揮完整的生物學(xué)功能[18-19]。微管相關(guān)蛋白輕鏈3B(microtubule-associated protein-1 light chain 3B,LC3B）作為自噬體的特異性標(biāo)記蛋白，具有LC3BⅠ和LC3BⅡ2種形式。當(dāng)自噬激活時(shí)，胞質(zhì)中的LC3BⅠ在泛素樣反應(yīng)酶的作用下轉(zhuǎn)變成LC3BⅡ，并且定位于自噬體內(nèi)外膜上，所以LC3BⅡ的含量與自噬體數(shù)量成正比；P62是選擇性自噬最重要的貨車蛋白，是連接LC3B與待降解泛素化底物的橋梁，通過結(jié)合泛素化蛋白進(jìn)入自噬體最終與溶酶體融合形成自噬溶酶體而得到清除，自噬流受到抑制時(shí)P62含量增加，反之下降。因此，檢測(cè)LC3B和P62的表達(dá)水平可觀察自噬流的變化過程。Cho等[17]在研究中證明，京尼平在膿毒癥肝損傷時(shí)通過抑制鈣蛋白酶系統(tǒng)修復(fù)受損的自噬流，從而保護(hù)膿毒性臟器功能的損傷。因此，未來在膿毒癥臟器損傷的管理和治療上，自噬是一個(gè)極具潛力的研究方向[20-22]。然而，CHR在自噬領(lǐng)域的研究暫無相關(guān)報(bào)道，因此本研究根據(jù)前期研究結(jié)果提出猜想，探討CHR是否調(diào)控自噬對(duì)膿毒癥所致ALI發(fā)揮保護(hù)性作用。與Cho等[17]實(shí)驗(yàn)結(jié)果相似的是，本研究發(fā)現(xiàn)CHR在減輕肺損傷的同時(shí)修復(fù)了受損的自噬流。運(yùn)用Western blot檢測(cè)LC3BⅡ和P62的蛋白表達(dá)水平，LPS誘導(dǎo)膿毒癥小鼠肺組織中的LC3BⅡ增高，說明其自噬激活，但P62增高則提示自噬流不通暢，無法發(fā)揮正常生理功能；高劑量CHR預(yù)處理后，膿毒癥模型小鼠肺組織中LC3BⅡ蛋白的表達(dá)量進(jìn)一步增高，而P62蛋白的表達(dá)量則明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。免疫熒光結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了LC3B和P62的熒光強(qiáng)度表達(dá)水平和蛋白表達(dá)水平趨勢(shì)一致。以上結(jié)果提示，CHR增加了膿毒癥小鼠肺組織中自噬體的形成，同時(shí)還促進(jìn)了自噬體的降解，使受損的自噬流恢復(fù)通暢。自噬體通過與溶酶體結(jié)合，包裹降解炎性蛋白或病原體等有害物質(zhì)，控制肺部炎癥的進(jìn)展，從而發(fā)揮臟器保護(hù)作用。

LPS作用6 h后，提取各組小鼠肺組織蛋白，Western blot檢測(cè)各組肺組織自噬標(biāo)志性蛋白LC3BⅡ和底物蛋白P62的表達(dá)變化情況。與正常對(duì)照組相比，LPS組LC3BⅡ和P62蛋白表達(dá)量明顯增加（P=0.008、0.000）；高、低劑量CHR預(yù)處理后，與LPS組相比，CHRH組LC3BⅡ蛋白表達(dá)量進(jìn)一步增加（P=0.000）（圖2A),P62蛋白表達(dá)量明顯減少（P=0.002）（圖2B),CHRL組LC3BⅡ和P62的蛋白表達(dá)變化趨勢(shì)不如CHRH組明顯。2.4 免疫熒光

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]CGA衍生多肽CHR抑制TNF-α引起的血管內(nèi)皮細(xì)胞高通透性的研究[J]. 古妮娜,張丹,羅麗,陳曉迎,謝明,劉景侖,姜麗萍.  中國(guó)急救醫(yī)學(xué). 2014 (08)
[2]Acute respiratory distress syndrome and lung injury: Pathogenetic mechanism and therapeutic implication[J]. Chain-Fa Su,Shang Jyh Kao,Hsing I Chen.  World Journal of Critical Care Medicine. 2012(02)



本文編號(hào)：3505621