脫氧核糖核酸酶Ⅰ（Deoxyribonuclease Ⅰ,簡(jiǎn)稱DNase Ⅰ）是生物體結(jié)構(gòu)和生命活動(dòng)的重要組成部分,其研究在醫(yī)學(xué)上疾病的臨床診斷、藥物研發(fā)等方面有著廣泛的應(yīng)用前景。通過(guò)分析DNase Ⅰ活性及對(duì)其抑制劑的研究,獲取重要的生物信息,可以有效發(fā)揮酶在各個(gè)領(lǐng)域的應(yīng)用價(jià)值和意義。此外,癌細(xì)胞和細(xì)菌作為當(dāng)今對(duì)人類生命和財(cái)產(chǎn)安全造成嚴(yán)重危害和損失的因素之一,對(duì)其進(jìn)行研究來(lái)降低危害程度的新形勢(shì)越來(lái)越刻不容緩。目前,用于檢測(cè)DNasel、細(xì)胞和細(xì)菌的分析方法多樣且各具特點(diǎn),熒光分析方法作為其中之一,因其具有檢測(cè)方法簡(jiǎn)單、背景干擾小、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn),已成為一種極有發(fā)展?jié)摿Φ姆治龇椒�。本論文主要以熒光光譜法和熒光偏振法分別對(duì)DNase Ⅰ活性和A549細(xì)胞及大腸桿菌0157:H7進(jìn)行檢測(cè)研究。該論文構(gòu)建了兩種簡(jiǎn)單、高靈敏、高特異的檢測(cè)DNase Ⅰ活性及細(xì)胞和細(xì)菌的方法,并對(duì)酶催化活性影響因素和實(shí)際樣品進(jìn)行研究。本論文由四部分組成。第1章為緒論部分,本章包括三部分,第一部分是對(duì)DNase Ⅰ進(jìn)行概述,主要對(duì)核酸酶和DNase Ⅰ及其檢測(cè)方法進(jìn)行介紹,此外概述了 DNA水凝膠的制備及應(yīng)用;第... 

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【部分圖文】：

氧化石墨烯法原理檢測(cè)DNaseI活性示意圖

這種相互作用。然而，當(dāng)ＤＮＡ鏈被ＤＮａｓｅ?Ｉ水解后會(huì)將雙螺旋結(jié)構(gòu)解開，接著堿??基外露，堿基中電子對(duì)之間的靜電作用增強(qiáng)，紫外吸收也隨之增大，所以會(huì)產(chǎn)生??增色效應(yīng)（Ｈｙｐｅｒｃｈｒｏｍｉｃ?ｅｆｆｅｃｔ），吸收光譜圖如圖１－５。因此，基于增色效應(yīng)基礎(chǔ)，??可以用該方法檢測(cè)ＤＮａｓｅ?Ｉ的活性。??｜０，；?Ｖ／祕(mì)產(chǎn)??°２：?，?，?，?，???Ｉ?｛?｜?ｉ?ｉ???ｉ???２２０?２３０?２４０?２５０?２６０?２７０?２８０?２９０?３００?５１０??Ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ，?ｍ／ｘ，??圖１－５増色法檢測(cè)ＤＮａｓｅ?Ｉ活性的吸收光譜圖??Ｆｉｇ．?１－５?Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ?ｓｐｅｃｔｒａ?ｏｆ?ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ＤＮａｓｅ?Ｉ?ｂｙ?ｈｙｐｅｒｃｈｒｏｍｉｃ?ｅｆｆｅｃｔ．??比色法（Ｃｈｒｏｍａｔｏｍｅｔｒｙ）是在顯色反應(yīng)基礎(chǔ)上，一種以對(duì)比或測(cè)量有色物質(zhì)??溶液顏色深淺程度來(lái)測(cè)定待測(cè)目標(biāo)含量的分析方法

按照刺激響應(yīng)性不同，ＤＮＡ水凝膠可分為多種敏感類型：ｐＨ、光、溫度和小分子??敏感型等水凝膠ＤＮＡ水凝膠不僅有普通凝膠的特性，又兼具ＤＮＡ原有的機(jī)??械強(qiáng)度高、形狀可塑、能實(shí)現(xiàn)藥物輸送等生物特性，因此可以實(shí)現(xiàn)在醫(yī)學(xué)和工業(yè)??等多方面的應(yīng)用。??ＳｏｏｎｇＨｏＵｍ等人［３８］于２００６年在Ｎａｔｕｒｅ上發(fā)表一篇關(guān)于ＤＮＡ水凝膠的研??宄。原理如圖１－９所示，該工作利用５’磷酸化的ＤＮＡ構(gòu)建了?Ｘ、Ｙ、Ｔ型三種形??狀的ＤＮＡ納米結(jié)構(gòu)，結(jié)構(gòu)的末端是具有回文結(jié)構(gòu)的黏性末端，主要通過(guò)Ｔ４連接??酶將粘性末端連接從而形成化學(xué)凝膠。研究發(fā)現(xiàn)，在三種結(jié)構(gòu)的凝膠中，Ｘ型結(jié)??構(gòu)形成的ＤＮＡ水凝膠穩(wěn)定性更好，時(shí)間跟蹤研究表明，該結(jié)構(gòu)的ＤＮＡ凝膠在室??溫下放置兩周結(jié)構(gòu)依然較好，仍然穩(wěn)定存在的ＤＮＡ水凝膠比例超過(guò)７０％，而相比??于設(shè)計(jì)的輸送胰島素的ＤＮＡ結(jié)構(gòu)水凝膠，其Ｙ型和Ｔ型水凝膠未降解比例減小??了?２０％，僅僅占原來(lái)的５０％，更嚴(yán)重的是，不加胰島素的空白Ｙ型ＤＮＡ結(jié)構(gòu)更??不穩(wěn)定，會(huì)在２天后全部降解，與此同時(shí)，Ｔ型結(jié)構(gòu)凝膠７天后降解速度也很快。??這充分說(shuō)明形成凝膠初期所設(shè)計(jì)的ＤＮＡ形狀會(huì)密切影響ＤＮＡ水凝膠的穩(wěn)定性。??該發(fā)現(xiàn)也證明ＤＮＡ水凝膠可以實(shí)現(xiàn)降解，同時(shí)結(jié)合其良好的生物相容性，所以??３Ｄ細(xì)胞培養(yǎng)、藥物輸送和細(xì)胞轉(zhuǎn)移等應(yīng)用的實(shí)現(xiàn)是具有很大希望的。??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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