發(fā)布時間：2021-10-23 17:58

　　背景:膿毒癥是一個世界性的嚴重臨床病癥,《第三版膿毒癥與感染性休克定義國際共識》將其定義為由于宿主對感染應答失調(diào)所導致的威脅生命的多器官功能衰竭,其幸存患者往往存在一定程度的身體、心理以及認知障礙,且后期的死亡風險顯著增加。目前,人們已經(jīng)認識到腸道微生態(tài)對機體健康極為重要,在疾病預后等方面也扮演重要角色,改善腸道微生態(tài)有利于患者預后。但是膿毒癥治療過程中,醫(yī)療介入尤其是抗生素使用常會破壞腸道穩(wěn)態(tài),而腸道微生態(tài)紊亂也可誘發(fā)膿毒癥。近些年,中醫(yī)認為腸道微生態(tài)理論與中醫(yī)存在很多異曲同工之處,并且一些傳統(tǒng)的中藥復方在治療疾病的同時可以調(diào)理腸道微生態(tài),這引起人們的極大關注,但是相關的深度測序數(shù)據(jù)甚少。目的:該研究旨在探討廣譜抗生素、益生菌、清熱解毒方劑對實驗性膿毒癥大鼠的治療效果,并對比三種治療用藥在短期內(nèi)對腸道微生態(tài)的作用特點,為藥物對腸道菌群方面的作用或副作用研究提供一定的數(shù)據(jù)基礎。方法:將健康雄性Wistar大鼠隨機分為假手術組（Z組,n=12）和膿毒癥模型組（n=98）,后者采用盲腸結扎穿孔法（Cecal ligation and puncture,CLP）制備大鼠膿毒癥模型,然后隨機分... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

SrRNA基因不同位置堿基變異程度

天津醫(yī)科大學碩士學位論文早在 19 世紀八十年代，Carrico 等[59]提出“胃腸道是多器官功能障礙綜合征（Multiple organ dysfunction syndrome，MODS）的始動器官”的著名論點。Prescott等[60]將微生物群紊亂與膿毒癥的關系更嚴謹?shù)谋硎鋈鐖D 2 所示，隨著微生物群紊亂程度的加重以及紊亂次數(shù)的增多，使膿毒癥的發(fā)病風險不斷增加。腸道微生物紊亂可引其腸壁的緊密連接受損、腸道的滲透性增加，導致腸源性膿毒癥的發(fā)病風險上升。反之，無論是疾病本身或者醫(yī)源性干預所致，腸道也是膿毒癥發(fā)生時最常受累的器官之 ，但因其缺乏特征性的表現(xiàn)， 直被忽視。膿毒癥治療常采用廣譜抗生素、液體復蘇以及器官功能支持等，尤其是抗菌藥物的使用是干擾腸道微生物群落穩(wěn)態(tài)的主要因素之[61]�？傊c道微生物在膿毒癥的發(fā)病機理中發(fā)揮重要作用，而膿毒癥本身抑或是治療干預導致的腸道菌群失衡會促進器官衰竭的發(fā)展，或導致不良預后[62, 63]。在膿毒癥治療過程中盡量減少腸道菌群紊亂的發(fā)生或及時矯正腸道菌群紊亂是降低這種惡性循環(huán)發(fā)生的當務之急，也是控制膿毒癥發(fā)生最經(jīng)濟的方法。

圖 3 本課題技術路線腸道菌群分析：使用糞便基因組 DNA 提取試劑盒制備腸道內(nèi)容物中宏基因組 DNA，采用 16S rDNA V3 通用引物擴增出腸道微生物的 V3 區(qū)域，進行測序文庫構建。16S rDNA V3 區(qū)測序采用基于半導體芯片的 Ion Torrent PGM 測序平臺，測序過程中在芯片上依次摻入 dGTP、dCTP、dATP 以及 dTTP，當摻入的脫氧核糖核苷酸與芯片上的模板發(fā)生堿基互補配對就會有 H+釋放，引起芯片上電位改變，而被芯片底部的傳感器感知并直接轉化為數(shù)字信號，達到邊合成邊測序的目的。測序獲得的數(shù)據(jù)利用 Mothur 分析軟件進行 PCA、NMDS、PCoA分析，通過數(shù)據(jù)庫比對進行大鼠腸道內(nèi)容物中微生物菌落多樣性進行描述，基于 heatmap 圖和 Metastats 分析揭示各組間物種顯著差異。利用醇水法萃取腸道內(nèi)容物用于代謝物分析：采用 HPLC-Q-TOF-MS 技術進行結合多變量統(tǒng)計學方法對大鼠腸道內(nèi)容中的代謝產(chǎn)物進行代謝指紋分析。通過上述腸道微生物群落及代謝物分析，了解抗生素、益生菌、清熱解毒方劑在治療膿毒癥的同時，對腸道微生態(tài)的影響，為研究治療藥物對腸道的作用以及副作用提供 定的數(shù)據(jù)基礎。

【參考文獻】：
期刊論文
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[7]清熱解毒方對膿毒癥大鼠靜脈血細胞黏附分子的影響[J]. 楊秀竹,楊靜,張艷萍,劉洪斌.  中國實驗方劑學雜志. 2010(08)
[8]清熱解毒方對膿毒癥大鼠的治療作用[J]. 劉洪斌,吳咸中,李東華,王倩,楊秀竹,薛小平,張艷萍.  中國中西醫(yī)結合外科雜志. 2008(06)



本文編號：3453638