背景:膿毒癥是一個(gè)世界性的嚴(yán)重臨床病癥,《第三版膿毒癥與感染性休克定義國(guó)際共識(shí)》將其定義為由于宿主對(duì)感染應(yīng)答失調(diào)所導(dǎo)致的威脅生命的多器官功能衰竭,其幸存患者往往存在一定程度的身體、心理以及認(rèn)知障礙,且后期的死亡風(fēng)險(xiǎn)顯著增加。目前,人們已經(jīng)認(rèn)識(shí)到腸道微生態(tài)對(duì)機(jī)體健康極為重要,在疾病預(yù)后等方面也扮演重要角色,改善腸道微生態(tài)有利于患者預(yù)后。但是膿毒癥治療過(guò)程中,醫(yī)療介入尤其是抗生素使用常會(huì)破壞腸道穩(wěn)態(tài),而腸道微生態(tài)紊亂也可誘發(fā)膿毒癥。近些年,中醫(yī)認(rèn)為腸道微生態(tài)理論與中醫(yī)存在很多異曲同工之處,并且一些傳統(tǒng)的中藥復(fù)方在治療疾病的同時(shí)可以調(diào)理腸道微生態(tài),這引起人們的極大關(guān)注,但是相關(guān)的深度測(cè)序數(shù)據(jù)甚少。目的:該研究旨在探討廣譜抗生素、益生菌、清熱解毒方劑對(duì)實(shí)驗(yàn)性膿毒癥大鼠的治療效果,并對(duì)比三種治療用藥在短期內(nèi)對(duì)腸道微生態(tài)的作用特點(diǎn),為藥物對(duì)腸道菌群方面的作用或副作用研究提供一定的數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。方法:將健康雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組（Z組,n=12）和膿毒癥模型組（n=98）,后者采用盲腸結(jié)扎穿孔法（Cecal ligation and puncture,CLP）制備大鼠膿毒癥模型,然后隨機(jī)分... 

【文章來(lái)源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：77 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

SrRNA基因不同位置堿基變異程度

天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文早在 19 世紀(jì)八十年代，Carrico 等[59]提出“胃腸道是多器官功能障礙綜合征（Multiple organ dysfunction syndrome，MODS）的始動(dòng)器官”的著名論點(diǎn)。Prescott等[60]將微生物群紊亂與膿毒癥的關(guān)系更嚴(yán)謹(jǐn)?shù)谋硎鋈鐖D 2 所示，隨著微生物群紊亂程度的加重以及紊亂次數(shù)的增多，使膿毒癥的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)不斷增加。腸道微生物紊亂可引其腸壁的緊密連接受損、腸道的滲透性增加，導(dǎo)致腸源性膿毒癥的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)上升。反之，無(wú)論是疾病本身或者醫(yī)源性干預(yù)所致，腸道也是膿毒癥發(fā)生時(shí)最常受累的器官之 ，但因其缺乏特征性的表現(xiàn)， 直被忽視。膿毒癥治療常采用廣譜抗生素、液體復(fù)蘇以及器官功能支持等，尤其是抗菌藥物的使用是干擾腸道微生物群落穩(wěn)態(tài)的主要因素之[61]。總之，腸道微生物在膿毒癥的發(fā)病機(jī)理中發(fā)揮重要作用，而膿毒癥本身抑或是治療干預(yù)導(dǎo)致的腸道菌群失衡會(huì)促進(jìn)器官衰竭的發(fā)展，或?qū)е虏涣碱A(yù)后[62, 63]。在膿毒癥治療過(guò)程中盡量減少腸道菌群紊亂的發(fā)生或及時(shí)矯正腸道菌群紊亂是降低這種惡性循環(huán)發(fā)生的當(dāng)務(wù)之急，也是控制膿毒癥發(fā)生最經(jīng)濟(jì)的方法。

圖 3 本課題技術(shù)路線腸道菌群分析：使用糞便基因組 DNA 提取試劑盒制備腸道內(nèi)容物中宏基因組 DNA，采用 16S rDNA V3 通用引物擴(kuò)增出腸道微生物的 V3 區(qū)域，進(jìn)行測(cè)序文庫(kù)構(gòu)建。16S rDNA V3 區(qū)測(cè)序采用基于半導(dǎo)體芯片的 Ion Torrent PGM 測(cè)序平臺(tái)，測(cè)序過(guò)程中在芯片上依次摻入 dGTP、dCTP、dATP 以及 dTTP，當(dāng)摻入的脫氧核糖核苷酸與芯片上的模板發(fā)生堿基互補(bǔ)配對(duì)就會(huì)有 H+釋放，引起芯片上電位改變，而被芯片底部的傳感器感知并直接轉(zhuǎn)化為數(shù)字信號(hào)，達(dá)到邊合成邊測(cè)序的目的。測(cè)序獲得的數(shù)據(jù)利用 Mothur 分析軟件進(jìn)行 PCA、NMDS、PCoA分析，通過(guò)數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)進(jìn)行大鼠腸道內(nèi)容物中微生物菌落多樣性進(jìn)行描述，基于 heatmap 圖和 Metastats 分析揭示各組間物種顯著差異。利用醇水法萃取腸道內(nèi)容物用于代謝物分析：采用 HPLC-Q-TOF-MS 技術(shù)進(jìn)行結(jié)合多變量統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)大鼠腸道內(nèi)容中的代謝產(chǎn)物進(jìn)行代謝指紋分析。通過(guò)上述腸道微生物群落及代謝物分析，了解抗生素、益生菌、清熱解毒方劑在治療膿毒癥的同時(shí)，對(duì)腸道微生態(tài)的影響，為研究治療藥物對(duì)腸道的作用以及副作用提供 定的數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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