目的:為更好的評價冠心病的發(fā)病風(fēng)險,選取系統(tǒng)炎癥和氧化應(yīng)激標(biāo)志物髓過氧化物酶（myelopexoxidase,MPO）作為研究對象,建立人血中MPO的熒光免疫層析定量檢測方法,為臨床早期篩查及輔助診斷冠心病提供一種靈敏度高,特異性好,操作簡便的快速檢測方法。方法:1.利用生物信息學(xué)技術(shù)分析MPO蛋白B細(xì)胞表位,篩選兩條特異性的MPO多肽序列（A、B）,合成該多肽,采用碳二亞胺法分別與BSA、OVA偶聯(lián)制備多肽偶聯(lián)物,透析后對多肽偶聯(lián)物進(jìn)行紫外光譜掃描法及SDS-PAGE鑒定。2.利用上述制備的MPO（A）-BSA和MPO（B）-BSA多肽偶聯(lián)物分別免疫小鼠,經(jīng)細(xì)胞融合、克隆化、亞型鑒定、小鼠腹腔誘生及蛋白純化等過程制備MPO單克隆抗體。3.利用熒光免疫層析技術(shù),對原材料及工藝條件進(jìn)行優(yōu)化研究,對線性范圍、靈敏度、精密性等功能性指標(biāo)進(jìn)行評價研究,初步建立MPO熒光免疫層析定量檢測方法。結(jié)果:1.成功制備了MPO（A）-BSA、MPO（B）-BSA和MPO（A）-OVA、MPO（B）-OVA多肽偶聯(lián)物。2.篩選出6株IgG1亞型的陽性細(xì)胞株,并制備6株單克隆抗體,其編號分別為:2A1,3C... 

【文章來源】：鄭州大學(xué)河南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

EDC偶聯(lián)原理

試紙條判斷結(jié)果

MPO多肽-BSA和BSA的紫外光譜圖

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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[8]新型血清髓過氧化物酶電化學(xué)免疫傳感器的研究[D]. 劉蓓.重慶醫(yī)科大學(xué) 2012
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本文編號：3406099