目的:為更好的評(píng)價(jià)冠心病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn),選取系統(tǒng)炎癥和氧化應(yīng)激標(biāo)志物髓過氧化物酶（myelopexoxidase,MPO）作為研究對(duì)象,建立人血中MPO的熒光免疫層析定量檢測(cè)方法,為臨床早期篩查及輔助診斷冠心病提供一種靈敏度高,特異性好,操作簡(jiǎn)便的快速檢測(cè)方法。方法:1.利用生物信息學(xué)技術(shù)分析MPO蛋白B細(xì)胞表位,篩選兩條特異性的MPO多肽序列（A、B）,合成該多肽,采用碳二亞胺法分別與BSA、OVA偶聯(lián)制備多肽偶聯(lián)物,透析后對(duì)多肽偶聯(lián)物進(jìn)行紫外光譜掃描法及SDS-PAGE鑒定。2.利用上述制備的MPO（A）-BSA和MPO（B）-BSA多肽偶聯(lián)物分別免疫小鼠,經(jīng)細(xì)胞融合、克隆化、亞型鑒定、小鼠腹腔誘生及蛋白純化等過程制備MPO單克隆抗體。3.利用熒光免疫層析技術(shù),對(duì)原材料及工藝條件進(jìn)行優(yōu)化研究,對(duì)線性范圍、靈敏度、精密性等功能性指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià)研究,初步建立MPO熒光免疫層析定量檢測(cè)方法。結(jié)果:1.成功制備了MPO（A）-BSA、MPO（B）-BSA和MPO（A）-OVA、MPO（B）-OVA多肽偶聯(lián)物。2.篩選出6株IgG1亞型的陽(yáng)性細(xì)胞株,并制備6株單克隆抗體,其編號(hào)分別為:2A1,3C... 

【文章來源】：鄭州大學(xué)河南省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：62 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

EDC偶聯(lián)原理

試紙條判斷結(jié)果

MPO多肽-BSA和BSA的紫外光譜圖

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]腫瘤篩查用（熱休克蛋白90α）快速檢測(cè)試劑的研制[D]. 李娜.鄭州大學(xué) 2017
[2]抗人TK1單克隆抗體的制備及化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法的初步建立[D]. 趙二霞.鄭州大學(xué) 2017
[3]基于家蠶—桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)制備人髓過氧化物酶的研究[D]. 陳俏梅.江蘇大學(xué) 2016
[4]髓過氧化物酶（MPO）不同檢測(cè)樣本參考區(qū)間的臨床研究[D]. 王永博.昆明醫(yī)科大學(xué) 2016
[5]NT-proBNP單克隆抗體的研制及ELISA定量檢測(cè)方法的建立[D]. 葛新杰.鄭州大學(xué) 2015
[6]冠心病患者介入治療前后髓過氧化物酶水平的早期變化及意義[D]. 王慧潔.南方醫(yī)科大學(xué) 2014
[7]牛副流感病毒3型血清學(xué)調(diào)查及其單克隆抗體的制備與應(yīng)用[D]. 王海勇.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2014
[8]新型血清髓過氧化物酶電化學(xué)免疫傳感器的研究[D]. 劉蓓.重慶醫(yī)科大學(xué) 2012
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本文編號(hào)：3406099