DNA甲基化是表觀遺傳學(xué)中一個重要的部分,異常的甲基化和許多疾病有關(guān),已引起人們的廣泛關(guān)注。此外,最新研究表明,在Fe²⁺和α-KG存在下,TET蛋白能夠?qū)?-甲基胞嘧啶（5mC）轉(zhuǎn)化為5-羥甲基胞嘧啶（5hmC）。隨后,在β-GT的催化下,能夠特異性的將糖基引入5hmC中,進(jìn)行下一步修飾。更為重要的是和5mC相比,基因突變導(dǎo)致5hmC含量降低,這使5hmC的檢測更加困難。因此,靈敏檢測5hmC至關(guān)重要。目前DNA羥甲基化的檢測方法主要有薄層色譜法、單分子實時測序、紫外檢測、熒光檢測和液質(zhì)聯(lián)用等。盡管這些方法能夠?qū)崿F(xiàn)5hmC的檢測,但是它們?nèi)源嬖谝恍┚窒扌浴＠绫由V法能夠造成環(huán)境污染,同時,由于放射性同位素的使用,能夠?qū)ι锝M織造成不同程度的損害。因此,為了解決這些問題,尋找新的檢測方法顯得尤為重要。本文利用AuNCs、Si O₂-SPAABs-HRP、Ru-PAMAM-avidin和PAMAM-Ag-NG納米復(fù)合材料,并通過酶放大技術(shù),制備了一種電化學(xué)傳感器和三種ECL傳感器,對TET和β-GT的活性進(jìn)行了分析并且對5-羥甲基胞嘧啶的含... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

基于AuNCs-H2O2ECL生物傳感器檢測5-及甲基胞嘧啶，TET1，β-糖基轉(zhuǎn)移酶活性原理圖

圖 2.2 基于酶催化和 SPAABs 電化學(xué)生物傳感器檢測 5-羥甲基胞嘧啶原理圖。2.2 Schematic illustration of the amperometric biosensor for 5-hydroxymethylcytosine based on enzymatic catalysusing spherical poly(acrylic acid) brushes..2.1 石墨烯-苝-3,4, 9, 10-四羧酸(GR-PTCA)納米復(fù)合材料的制備GR-PTCA 的制備參考文獻(xiàn)(Honget al., 2009; Xuet al., 2016)。首先稱取 0.005 g烯并將其分散于 5 mL 二次蒸餾水中，超聲后得到 1 mg/mL均勻溶液。然后稱取3, 4, 9, 10-四羧酸二酐，將其溶于 10 mL2 % KOH 溶液中，80 ℃水浴反應(yīng) 1 h。后，用鹽酸調(diào)節(jié) pH 使其維持在弱酸性。隨后離心收集紅色沉淀，真空干燥，A。再將 0.1 %殼聚糖溶液和 1 mg/mL 石墨烯等體積混合，得到殼聚糖-石墨烯溶10 mL殼聚糖-石墨烯的溶液，加入 4975 μL二次水超聲分散，再加入 25 μL，20 mA 溶液，混合后進(jìn)行超聲，然后 12000 r 離心 10 min，即可制得 GR-PTCA 納米。.2.2 SiO2-SPAABs-HRP 的制備及表征SiO-SPAABs-HRP 的制備參照文獻(xiàn)(Qu et al., 2014)，取 0.03 g SiO@SPAABs

圖 2.3 基于 Fe3O4@SiO2及 PAMAM 樹狀高分子 ECL 免疫傳感器檢測 5-羥甲基胞嘧啶原理圖 Schematic illustration of the electrochemiluminescence immunosensor for 5-hydroxymethylcytosine don Fe3O4@SiO2nanoparticles and PAMAM dendrimers.4 ECL信號檢測建了 種新型的夾層式 ECL 免疫傳感器，用于 5-羥甲基胞嘧啶基因水中 Fe3O4@SiO2作為抗體載體，活化后的 Ru-PAMAM-adivin 作為信號將 PTCA-GO 修飾在裸玻碳電極表面，通過酰胺鍵進(jìn)行連接，捕@SiO2-Ab(Liuet al.，2017)。隨后，通過 Phos-tag-biotion 的連接，Ru-PAMA 的反應(yīng)，獲得 ECL信號。實驗選擇了 Fe3O4@SiO2NPs 和 Ru-PAMAM-adivin，具有兩個方面的優(yōu)Fe3O4@SiO2NPs 不僅具有較大的比表面積，使其捕獲更多的抗體，而且能的穩(wěn)定性。(2)羧基修飾的 PAMAM 具有很大的空間，能夠負(fù)載更多的放大因素，ECL信號顯著增大，靈敏度明顯提高。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]磁性Fe3O4@PS@PAMAM-Ag復(fù)合催化粒子的制備及其可再生催化性能（英文）[J]. 黨高飛,石艷,付志峰,楊萬泰.  催化學(xué)報. 2012(04)
[2]變性高效液相色譜法檢測CpG島胞嘧啶甲基化[J]. 鄧大君,鄧國仁,呂有勇,周靜,辛慧君.  中華醫(yī)學(xué)雜志. 2001(03)



本文編號：3387688