本文關(guān)鍵詞：有機(jī)助溶劑的毒性考察及新型體外光學(xué)藥敏試驗(yàn)方法的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的目前抗菌藥物多為在水中微溶或難溶的大分子有機(jī)化合物,因此在常規(guī)藥物敏感實(shí)驗(yàn)的活性檢測(cè)中常需有機(jī)溶劑助溶。但有機(jī)溶劑可導(dǎo)致微生物的細(xì)胞膜受損,活性降低甚至死亡,因而影響藥敏實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。因此,有必要嚴(yán)格控制藥敏實(shí)驗(yàn)中有機(jī)助溶劑的種類和用量。本文嘗試通過常規(guī)藥物敏感實(shí)驗(yàn),如肉湯稀釋法和紙片擴(kuò)散法對(duì)多種常用有機(jī)助溶劑的毒性進(jìn)行詳細(xì)考察,以各種溶劑對(duì)受試微生物活性的影響作為指標(biāo),建立溶劑種類與用量間的關(guān)系模型,為抗菌藥物體外抑菌實(shí)驗(yàn)所用助溶劑的種類選擇和添加限量提供參考。此外,實(shí)踐操作中各種標(biāo)準(zhǔn)藥物敏感實(shí)驗(yàn)周期長(zhǎng),動(dòng)輒需要幾十個(gè)小時(shí),而且操作復(fù)雜,需要有經(jīng)驗(yàn)的專業(yè)人員反復(fù)進(jìn)行驗(yàn)證,耗時(shí)耗力。因此建立快速、靈敏及操作簡(jiǎn)便的藥效檢測(cè)方法在科研和應(yīng)用方面均有極其重要的意義。本研究以常見染料—普魯士藍(lán)(PB)為光學(xué)探針,大腸埃希氏菌(E.coli)為模型微生物構(gòu)建一種新型光學(xué)體外藥效檢測(cè)方法,用于快速檢測(cè)藥物有效性及篩選抗菌新化合物,彌補(bǔ)現(xiàn)有藥敏實(shí)驗(yàn)方法的缺陷。方法通過常規(guī)藥敏實(shí)驗(yàn)方法(紙片擴(kuò)散法、肉湯稀釋法),并參照生長(zhǎng)曲線法測(cè)定有機(jī)溶劑二甲基亞砜(DMSO)、丙酮和乙醇對(duì)E.coli及金黃色葡萄球菌(S.aureus)活性的抑制作用,通過掃描電子顯微鏡(SEM)觀察經(jīng)過有機(jī)溶劑作用后微生物形貌的變化。以K3[Fe(CN)6]為媒介體,當(dāng)其與微生物接觸后,可定量轉(zhuǎn)移微生物呼吸作用產(chǎn)生的電子,并生成K4[Fe(CN)6],再與Fe Cl3發(fā)生化學(xué)反應(yīng)生成PB。由于抗菌藥物可抑制微生物的呼吸作用,減少K4[Fe(CN)6]的生成,繼而影響PB的生成量。所以根據(jù)PB生成量與微生物呼吸作用的關(guān)系,在700 nm測(cè)定PB含量的變化用以反映藥物對(duì)受試菌株的作用效力。通過考察菌濃、培養(yǎng)時(shí)間以及營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的加入等條件對(duì)方法靈敏度的影響,確定最佳實(shí)驗(yàn)條件,并將以PB作為探針的光學(xué)方法應(yīng)用于常用抗生素藥物的有效性檢測(cè)。結(jié)果以肉湯稀釋法考察DMSO、丙酮和乙醇3種有機(jī)助溶劑對(duì)E.coli和S.aureus均達(dá)到20%抑菌率時(shí)的濃度(體積比)分別為1.00%、0.25%、2.00%與1.00%、1.00%、0.50%;以生長(zhǎng)曲線法考察,上述3種助溶劑對(duì)E.coli和S.aureus均達(dá)到20%抑菌率時(shí)的濃度(體積比)分別為0.5%、1.0%、0.5%與1.0%、0.5%、0.5%;而采用紙片擴(kuò)散法考察時(shí),乙醇和DMSO濃度(體積比)高達(dá)32%時(shí)才會(huì)對(duì)E.coli產(chǎn)生明顯抑菌圈,32%(體積比)的丙酮對(duì)E.coli無明顯抑菌圈出現(xiàn);在實(shí)驗(yàn)濃度下,3種有機(jī)助溶劑濃度高達(dá)32%(體積比)時(shí),對(duì)S.aureus均無抑菌圈出現(xiàn)。將三種方法進(jìn)行對(duì)比后得出:當(dāng)乙醇、丙酮和DMSO的濃度(體積比)均低于0.5%時(shí),上述助溶劑的抑菌率可控制在20%以內(nèi),對(duì)細(xì)菌體活性的影響較小;相對(duì)于肉湯稀釋法,助溶劑在紙片擴(kuò)散法中對(duì)受試菌體的影響較小。同時(shí),SEM結(jié)果也表明控制有機(jī)助溶劑的使用量可有效降低其對(duì)E.coli形貌的影響。將E.coli呼吸作用的受到5%抑制時(shí)抗生素的濃度定為藥物的5%有效性(EC5%),考察抗菌藥物對(duì)E.coli的抑制作用。通過PB光學(xué)方法測(cè)得頭孢吡肟、頭孢曲松鈉、頭孢哌酮鈉、哌拉西林、阿莫西林、慶大霉素、阿米卡星和左氧氟沙星8種常見抗生素對(duì)20種E.coli臨床分離物產(chǎn)生EC5%時(shí)的濃度分別為2、2、4、4、10、4、8和8 mg·L-1。除了慶大霉素,PB光學(xué)方法與美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)推薦的肉湯稀釋法比較,結(jié)果具有較好的相似度(P0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論與DMSO和丙酮比較,乙醇抑制微生物的生長(zhǎng)繁殖能力更加顯著;當(dāng)有機(jī)助溶劑的濃度相同時(shí),其在液態(tài)實(shí)驗(yàn)條件下(肉湯稀釋法和生長(zhǎng)曲線法)對(duì)微生物的生長(zhǎng)影響較大。因此,進(jìn)行藥敏實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)綜合考慮有機(jī)溶劑種類和用量以確定具體的實(shí)驗(yàn)方法。區(qū)別于常規(guī)藥敏實(shí)驗(yàn),以PB為探針的光學(xué)方法更為快捷、簡(jiǎn)便,在抗生素藥效檢測(cè)中具有較好的靈敏度,且所得結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)藥敏實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果相關(guān)性較好。所以,基于PB的光學(xué)檢測(cè)法在臨床診斷和抗生素類藥物有效性檢測(cè)方面具有一定的應(yīng)用潛力。
【關(guān)鍵詞】：有機(jī)溶劑 藥敏實(shí)驗(yàn) 普魯士藍(lán) 光學(xué)方法 抗生素 藥物有效性
【學(xué)位授予單位】：錦州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R446.5
【目錄】：

• 中文論著摘要5-8
• 英文論著摘要8-12
• 英文縮略語表12-13
• 前言13-16
• 第一章 多種常規(guī)實(shí)驗(yàn)方法考察有機(jī)溶劑對(duì)細(xì)菌活性的影響及其安全使用限量16-32
• 實(shí)驗(yàn)材料與方法16-19
• 結(jié)果與討論19-31
• 結(jié)論31-32
• 第二章 新型體外光學(xué)藥敏試驗(yàn)方法—普魯士藍(lán)光學(xué)法的基礎(chǔ)研究及應(yīng)用32-43
• 實(shí)驗(yàn)材料與方法33-36
• 結(jié)果與討論36-42
• 結(jié)論42-43
• 本研究創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)43-44
• 參考文獻(xiàn)44-50
• 文獻(xiàn)綜述50-68
• 參考文獻(xiàn)59-68
• 在學(xué)期間科研成績(jī)68-69
• 致謝69-70
• 個(gè)人簡(jiǎn)介70-71

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 ;0.15％強(qiáng)的松溶液助溶劑的優(yōu)選[J];成都醫(yī)藥通訊;1976年01期

2 劉杰;曾健青;李衛(wèi)民;高英;陳w，

本文編號(hào)：337141