目的通過檢測(cè)臨床分離的銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa,PA）氨基糖苷類修飾酶基因及16SrRNA甲基化酶基因的表達(dá)情況,研究氨基糖苷類修飾酶及16SrRNA甲基化酶與PA耐藥的相關(guān)性,為指導(dǎo)臨床合理化用藥及抗菌藥物研發(fā)提供依據(jù)和幫助。方法（1）選擇安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院2013年11月-2015年12月期間的臨床標(biāo)本,經(jīng)分離純培養(yǎng)后,采用法國(guó)梅里埃公司VETEC 2 COMPACT全自動(dòng)微生物分析儀鑒定和藥敏檢測(cè),藥敏判斷標(biāo)準(zhǔn)按CLSI 2015年版標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的臨界值判定耐藥、中介和敏感,并對(duì)9種臨床常用代表性抗菌藥物的耐藥情況進(jìn)行分析,篩選氨基糖苷類耐藥的銅綠假單胞菌菌株。（2）采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)對(duì)氨基糖苷類修飾酶基因和16SrRNA甲基化酶基因擴(kuò)增,并進(jìn)行序列測(cè)定及分析。氨基糖苷類修飾酶基型包括aac（3）-I,aac（3）-II,aac（6’）-I,aac（6’）-II,ant（2’’）-I和ant（3’’）-I共6種,16SrRNA甲基化酶基因型包括armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD,應(yīng)用2%瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)分析擴(kuò)增產(chǎn)物,與陽(yáng)性對(duì)照分... 

【文章來(lái)源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁(yè)數(shù)】：51 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

rmtB基因電泳圖譜

3.2.2 陽(yáng)性基因測(cè)序?qū)?PCR 擴(kuò)增電泳結(jié)果中含有 rmtB 基因的陽(yáng)性產(chǎn)物進(jìn)行基因測(cè)序，PCR 陽(yáng)性產(chǎn)物為 PCR 直接全自動(dòng)熒光法測(cè)序，委托上海華津公司純化并進(jìn)行 DNA 測(cè)序，測(cè)序在美國(guó) ABI 公司 3730 型毛細(xì)管全自動(dòng)測(cè)序儀上進(jìn)行。3.2.3 序列比對(duì)結(jié)果 測(cè)序后通過 BLAST 程序進(jìn)行分析，序列與美國(guó)核酸庫(kù)（GenBank）已登錄的 rmtB 序列 100%同源，其在 GenBank 中的序列號(hào)為FJ483516.1，PCR 產(chǎn)物部分測(cè)序圖見圖 2 和圖 3。

圖 3 rmtB 基因反向測(cè)序圖Fig 3 reverse sequencing of gene rmtB（part）3.3 氨基糖苷類修飾酶基因檢測(cè)結(jié)果3.3.1 氨基糖苷類修飾酶電泳結(jié)果PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng) 2%瓊脂糖凝膠電泳，出現(xiàn)與陽(yáng)性對(duì)照分子相當(dāng)?shù)哪康臈l帶為陽(yáng)性。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：在 33 株氨基糖苷類耐藥的銅綠假單胞菌中，有 28 株產(chǎn)氨基糖苷類修飾酶，基因 aac(3)-II 共 15 株，aac(6')-I 共 9 株，aac(6')-II 共 15 株、ant(2'')-I 共 24 株 、ant(3'')-I 共 11 株，未擴(kuò)增出 aac(3)-I 基因，陽(yáng)性基因檢出率依次為 ant(2'')-I(32.43%)、aac(3)-II(20.27%)、aac(6')-II(20.27%)、ant(3'')-I（14.86%），aac(6')-I（12.16%），本研究中檢出率最高的基因型是 ant(2'')-I，有 5 株細(xì)菌未檢出氨基糖苷類修飾酶基因；27 株對(duì)氨基糖苷類抗生素中介及敏感的銅綠假單胞菌


本文編號(hào)：3334744