目的:據(jù)統(tǒng)計數(shù)據(jù)表明,近年來肺癌發(fā)病率及死亡率呈逐年上升趨勢,肺癌已成為我國城鎮(zhèn)居民死亡率最高的疾病。非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）可占全部肺癌的80%-85%。約2/3的NSCLC患者在明確診斷時已喪失手術(shù)治療的時機,放射治療與化學藥物治療相結(jié)合的綜合治療是局部進展期NSCLC的主要治療手段。然而在這些局部進展期NSCLC病例中,只有約10%的患者能夠達到完全緩解,其5年生存率也只有約15%。腫瘤細胞的放射抵抗是影響NSCLC放射治療療效的主要生物學因素之一。Raf激酶抑制蛋白（Raf kinase inhibitory protein,RKIP）,也被稱為PEBP-1,最初于1984年在牛大腦中被發(fā)現(xiàn),并被認為是磷脂酰乙醇胺結(jié)合蛋白（phosphatidylethanolamine-binding protein,PEBP）家族中的一員。RKIP作為Raf-MAPK-ERK信號轉(zhuǎn)導通路上重要的調(diào)節(jié)因子影響著諸如增殖、分化及血管生成等諸多方面的細胞功能。通過調(diào)節(jié)PI3K-AKT和NF-kB信號通路,RKIP在抑制腫瘤進展與轉(zhuǎn)移方面也發(fā)... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學遼寧省

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

RKIP在高表達的肺腺癌（a）肺鱗癌（c）和低表達的肺腺癌（b）肺鱗癌（d）中的情況，400x

圖 3.2 RKIP 表達水平不同患者的生存曲線3 NSCLC 患者預后的單因素分析采用 Cox 比例風險回歸模型分析患者的性別，年齡，病理分型，臨床分期，腫瘤大�。═ 分期），淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移程度（N 分期）以及 RKIP 表達水平與預后的。分析結(jié)果顯示 NSCLC 患者的原發(fā)腫瘤（T 分期）和 RKIP 表達情況與預后相

3 結(jié)果3.1 構(gòu)建沉默 RKIP 基因的 A549 和 SK-MES-1 細胞株以及測定沉默RKIP 基因前后的 A549 和 SK-MES-1 細胞中 RKIP 表達水平體外培養(yǎng)人肺腺癌細胞系 A549 和人肺鱗癌細胞系 SK-MES-1，收集處于對數(shù)生長期的細胞，提取蛋白。采用 Western blot 方法檢測人肺腺癌細胞系 A549 和人肺鱗癌細胞系 SK-MES-1 中 RKIP 蛋白表達水平。結(jié)果顯示，RKIP 蛋白在這兩種細胞系中均為高表達（與β-actin 濃度相比）。（圖 3.2）。將空載的慢病毒及攜帶可沉默RKIP基因表達的shRNA工具慢病毒分別轉(zhuǎn)入人肺腺癌細胞系 A549 和鱗癌細胞系 SK-MES-1 中，通過觀察被轉(zhuǎn)染細胞的熒光強度估測轉(zhuǎn)染效率（圖 3.1）。經(jīng)嘌呤霉素持續(xù)篩選后，最終得到轉(zhuǎn)入空載慢病毒的 A-EV和 SK-EV 細胞系，以及轉(zhuǎn)入可沉默 RKIP 基因表達的 shRNA 慢病毒的 A/RKIP-KD和 SK/RKIP-KD 細胞系。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Modulation of the MAP kinase signaling cascade by Raf kinase inhibitory protein[J]. Nicholas TRAKUL,Marsha R. ROSNER.  Cell Research. 2005(01)
[2]肺癌癌基因蛋白產(chǎn)物同步檢測的對比分析[J]. 趙彤,朱梅剛,黃宗義,張亞歷,張素娟,李梅芳.  癌癥. 1995(01)



本文編號：3309989