microRNAs（miRNAs）是一種重要的細胞調(diào)控分子,在一系列生命過程中發(fā)揮重要的調(diào)控作用,尤其是腫瘤的發(fā)生,因此miRNAs可作為一種有效的疾病診斷和預(yù)測的標(biāo)記物,對miRNAs的分析檢測是生物功能研究、疾病診斷以及相關(guān)基因藥物開發(fā)的關(guān)鍵技術(shù)。但由于其序列短、家族同源性高、含量少、在細胞中表達豐度低,因此設(shè)計構(gòu)建高靈敏高選擇性的miRNA檢測體系,是當(dāng)前miRNA檢測技術(shù)的發(fā)展熱點。基于此,我們設(shè)計構(gòu)建了一系列miRNA多功能檢測探針,經(jīng)不同信號放大手段,用于癌癥相關(guān)miRNA細胞內(nèi)外靈敏檢測與成像,為癌癥的早期診斷提供可靠而有效的新方法,同時構(gòu)建多功能化納米復(fù)合診療體系,實現(xiàn)腫瘤的有效診斷與高效治療。具體包括如下工作:1.基于Au-DNA條碼技術(shù)及酶輔助鏈循環(huán)的高靈敏性miRNA檢測策略:利用DNA生物條碼技術(shù),以短單鏈DNA報告探針替代目標(biāo)miRNA,形成一種“一對多”模式,實現(xiàn)目標(biāo)miRNA的高靈敏性、選擇性檢測。合理設(shè)計雙組份DNA鏈修飾的Au納米粒子,在有目標(biāo)miRNA存在的情況下,與單組份DNA鏈修飾的磁珠粒子通過雜交反應(yīng),形成三明治結(jié)構(gòu),并輔以剪切酶輔助的鏈循環(huán)信... 

【文章來源】：北京科技大學(xué)北京市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：139 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖２－１?ｍｉＲＮＡ的形成及其生物功能

微陣列技術(shù)又稱基因芯片技術(shù)，是指在平面基質(zhì)載體上，規(guī)則地、特異??性地吸附基因或基因產(chǎn)物，當(dāng)與熒光標(biāo)記的樣本ｍｉＲＮＡ雜交后，響應(yīng)位置??熒光信號的強弱即可反應(yīng)對應(yīng)基因表達的豐度（圖２－２）?ｆ％。其優(yōu)點是能夠??同時對多個樣本的表達量進行分析檢測，實現(xiàn)ｍｉＲＮＡ的高通量分析，但微??陣列分析技術(shù)對ｍｉＲＮＡ的純度質(zhì)量要求較高Ｍｌ。??ｍｉＲＮＡ??ｍｍ??Ｉ?Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ??Ｉ?ｌａｂｅｌｌｉｎｇ??（Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ??ｈｙｂｒｉｄ?ｉｚｔｉｏｎ??Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ?ｗｉｔｈ?ｃａｐｔｕｒｅ?ｐｒｏｂｅｓ??圖２－２微陣列分析技術(shù)在ｍｉＲＮＡ檢測中的應(yīng)用。??Ｆｉｇｕｒｅ?２－２?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ－ｂａｓｅｄ?ｍｉＲＮＡ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ．??基于ｍｉＲＮＡ小尺寸、低豐度的特性，目前微陣列技術(shù)主要專注于對探??針的設(shè)計及ｍｉＲＮＡ標(biāo)記等方面進行改善ｔ４９］。然而基于ＤＮＡ鏈的微陣列檢測??平臺的主要弊端是難以獲得用于全基因組表達檢測的Ｔｍ標(biāo)準(zhǔn)化檢測探針，??－６?－??

Ｆｉｇｕｒｅ?２－５?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｏｎ?ａｓｓａｙ?ｂａｓｅｄ?ｏｎ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ??ｑｕｅｎｃｈｉｎｇ?ｏｆ?Ａｕ?ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ．??如圖２－５所示，Ｗａｎｇ等人［６８１利用Ａｕ納米顆粒作為高效熒光淬滅粒子，??設(shè)計了一個無標(biāo)簽的競爭性ｍｉＲＮＡ檢測體系，實驗用Ａｕ納米粒子尺寸為??１０－２０?ｎｍ，將核酸分子通過鍵連接修飾于Ａｕ納米粒子表面，１０?ｎｍ的Ａｕ納??米粒子熒光淬滅效果可達８４％，２０?ｎｍ尺寸的Ａｕ淬滅效果為８２％，而商業(yè)??化的ＢＨＱ２淬滅分子的熒光淬滅效果只有５０％，該結(jié)果表明制備的Ａｕ納米??顆粒具有高效的熒光淬滅性質(zhì)。當(dāng)有高濃度目標(biāo)ｍｉＲＮＡ存在的情況下，??ｍｉＲＮＡ分子將連接Ａｕ納米顆粒的ＤＮＡ探針競爭下來，使熒光分子遠離Ａｕ??納米顆粒表面，熒光信號得以恢復(fù)，達到檢測的目的。該ｍｉＲＮＡ檢測體系??的檢測限為３．８ｐＭ


本文編號：3308730