發(fā)布時(shí)間：2021-07-28 22:01

　　microRNAs（miRNAs）是一種重要的細(xì)胞調(diào)控分子,在一系列生命過(guò)程中發(fā)揮重要的調(diào)控作用,尤其是腫瘤的發(fā)生,因此miRNAs可作為一種有效的疾病診斷和預(yù)測(cè)的標(biāo)記物,對(duì)miRNAs的分析檢測(cè)是生物功能研究、疾病診斷以及相關(guān)基因藥物開(kāi)發(fā)的關(guān)鍵技術(shù)。但由于其序列短、家族同源性高、含量少、在細(xì)胞中表達(dá)豐度低,因此設(shè)計(jì)構(gòu)建高靈敏高選擇性的miRNA檢測(cè)體系,是當(dāng)前miRNA檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展熱點(diǎn)�；诖�,我們?cè)O(shè)計(jì)構(gòu)建了一系列miRNA多功能檢測(cè)探針,經(jīng)不同信號(hào)放大手段,用于癌癥相關(guān)miRNA細(xì)胞內(nèi)外靈敏檢測(cè)與成像,為癌癥的早期診斷提供可靠而有效的新方法,同時(shí)構(gòu)建多功能化納米復(fù)合診療體系,實(shí)現(xiàn)腫瘤的有效診斷與高效治療。具體包括如下工作:1.基于Au-DNA條碼技術(shù)及酶輔助鏈循環(huán)的高靈敏性miRNA檢測(cè)策略:利用DNA生物條碼技術(shù),以短單鏈DNA報(bào)告探針替代目標(biāo)miRNA,形成一種“一對(duì)多”模式,實(shí)現(xiàn)目標(biāo)miRNA的高靈敏性、選擇性檢測(cè)。合理設(shè)計(jì)雙組份DNA鏈修飾的Au納米粒子,在有目標(biāo)miRNA存在的情況下,與單組份DNA鏈修飾的磁珠粒子通過(guò)雜交反應(yīng),形成三明治結(jié)構(gòu),并輔以剪切酶輔助的鏈循環(huán)信... 

【文章來(lái)源】：北京科技大學(xué)北京市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：139 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖２－１?ｍｉＲＮＡ的形成及其生物功能

微陣列技術(shù)又稱(chēng)基因芯片技術(shù)，是指在平面基質(zhì)載體上，規(guī)則地、特異??性地吸附基因或基因產(chǎn)物，當(dāng)與熒光標(biāo)記的樣本ｍｉＲＮＡ雜交后，響應(yīng)位置??熒光信號(hào)的強(qiáng)弱即可反應(yīng)對(duì)應(yīng)基因表達(dá)的豐度（圖２－２）?ｆ％。其優(yōu)點(diǎn)是能夠??同時(shí)對(duì)多個(gè)樣本的表達(dá)量進(jìn)行分析檢測(cè)，實(shí)現(xiàn)ｍｉＲＮＡ的高通量分析，但微??陣列分析技術(shù)對(duì)ｍｉＲＮＡ的純度質(zhì)量要求較高Ｍｌ。??ｍｉＲＮＡ??ｍｍ??Ｉ?Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ??Ｉ?ｌａｂｅｌｌｉｎｇ??（Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ??ｈｙｂｒｉｄ?ｉｚｔｉｏｎ??Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ?ｗｉｔｈ?ｃａｐｔｕｒｅ?ｐｒｏｂｅｓ??圖２－２微陣列分析技術(shù)在ｍｉＲＮＡ檢測(cè)中的應(yīng)用。??Ｆｉｇｕｒｅ?２－２?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ－ｂａｓｅｄ?ｍｉＲＮＡ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ．??基于ｍｉＲＮＡ小尺寸、低豐度的特性，目前微陣列技術(shù)主要專(zhuān)注于對(duì)探??針的設(shè)計(jì)及ｍｉＲＮＡ標(biāo)記等方面進(jìn)行改善ｔ４９］。然而基于ＤＮＡ鏈的微陣列檢測(cè)??平臺(tái)的主要弊端是難以獲得用于全基因組表達(dá)檢測(cè)的Ｔｍ標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)探針，??－６?－??

Ｆｉｇｕｒｅ?２－５?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｏｎ?ａｓｓａｙ?ｂａｓｅｄ?ｏｎ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ??ｑｕｅｎｃｈｉｎｇ?ｏｆ?Ａｕ?ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ．??如圖２－５所示，Ｗａｎｇ等人［６８１利用Ａｕ納米顆粒作為高效熒光淬滅粒子，??設(shè)計(jì)了一個(gè)無(wú)標(biāo)簽的競(jìng)爭(zhēng)性ｍｉＲＮＡ檢測(cè)體系，實(shí)驗(yàn)用Ａｕ納米粒子尺寸為??１０－２０?ｎｍ，將核酸分子通過(guò)鍵連接修飾于Ａｕ納米粒子表面，１０?ｎｍ的Ａｕ納??米粒子熒光淬滅效果可達(dá)８４％，２０?ｎｍ尺寸的Ａｕ淬滅效果為８２％，而商業(yè)??化的ＢＨＱ２淬滅分子的熒光淬滅效果只有５０％，該結(jié)果表明制備的Ａｕ納米??顆粒具有高效的熒光淬滅性質(zhì)。當(dāng)有高濃度目標(biāo)ｍｉＲＮＡ存在的情況下，??ｍｉＲＮＡ分子將連接Ａｕ納米顆粒的ＤＮＡ探針競(jìng)爭(zhēng)下來(lái)，使熒光分子遠(yuǎn)離Ａｕ??納米顆粒表面，熒光信號(hào)得以恢復(fù)，達(dá)到檢測(cè)的目的。該ｍｉＲＮＡ檢測(cè)體系??的檢測(cè)限為３．８ｐＭ


本文編號(hào)：3308730