酶聯(lián)免疫吸附法（Enzyme-Linked Immunosorbent Assays,ELISA）是將抗原抗體的特異性識別和酶對底物的高效催化作用相結(jié)合的一種非均相高通量免疫分析技術(shù)。傳統(tǒng)ELISA方法一般基于辣根過氧化物酶（Horseradish peroxidase,HRP）催化底物四甲基聯(lián)苯胺產(chǎn)生比色信號定量檢測目標物,其靈敏度較低且不利于裸眼檢測。近年來基于一些新型信號如熒光、等離子共振、電化學(xué)、化學(xué)發(fā)光等的高靈敏ELISA方法備受關(guān)注,在環(huán)境監(jiān)測、臨床診斷和食品安全等領(lǐng)域中發(fā)揮著重要的作用。本研究以乙肝表面抗原（HBsAg）和克羅諾桿菌（Cronobacter）為檢測對象,分別建立了基于新型信號輸出的熒光淬滅ELISA和等離子共振ELISA（Plasmonic ELISA,pELISA）方法,實現(xiàn)了對目標物的高靈敏檢測。巰基丙酸修飾的CdTe量子點（MPA-QDs）對H₂O₂極度敏感,微量H₂O₂即可使其熒光信號大大降低。因此,本研究以葡萄糖氧化酶作為酶標記物催化底物葡萄糖產(chǎn)H_2... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

基于GOx介導(dǎo)MPA-QDs熒光淬滅ELISA檢測HBsAg原理圖（后附彩圖）

運用本實驗檢測結(jié)果與醫(yī)院使用商業(yè)化時間分辨熒光試劑盒檢測結(jié)果作比對，以商業(yè)化試劑盒檢測結(jié)果為橫坐標，本實驗檢測結(jié)果為縱坐標繪制曲線，作相關(guān)性分析。2.3 結(jié)果與分析2.3.1 GOx 介導(dǎo)的 MPA-QDs 熒光淬滅表征MPA 修飾的 CdTe QDs 采用硼氫化鈉還原法合成[81]。在本研究中 MPA-QDs作為信號輸出材料，可以發(fā)出亮黃色熒光，通過紫外-可見吸收光譜和熒光發(fā)射光譜對其進行表征，MPA-QDs 在紫外光區(qū)域有較強吸收，在可見光區(qū) 568 nm 處有特征吸收峰，最大熒光發(fā)射波長為 590 nm（圖 2.2A）。圖 2.2B 顯示量子點平均粒徑在 4 nm 左右且具有很好的單分散性。在長達 12 個月的監(jiān)測過程中發(fā)現(xiàn)，在 4℃環(huán)境保存 MPA-QDs，顯示其具有良好的熒光穩(wěn)定性。

第二章 基于 CdTe 量子點熒光淬滅 ELISA 高靈敏檢測乙肝表面抗原下來，破壞了 QDs 的穩(wěn)定性，導(dǎo)致 QDs 發(fā)生聚集，熒光淬滅。因此本研究采用PBS（0.01 M，pH 7.4）作為信號輸出體系的緩沖溶液。MPA-QDs 對 H2O2的敏感度實驗結(jié)果如圖 2.3B 所示。QDs 的淬滅率隨 H2O2濃度的增加而增加，當 H2O2濃度介于 0.0975 ~ 6.25 μM 之間，與熒光淬滅率有很好的線性關(guān)系（R2= 0.9819），且淬滅率為 10%時的 H2O2濃度為 0.402 μM，表明 MPA-QDs 的熒光對 H2O2的濃度極為敏感。在 H2O2存在的條件下，MPA 和 CdTe 量子點之間的 Cd-S 鍵很容易被氧化形成有機二硫產(chǎn)物 RS-SR，導(dǎo)致較多的 MPA 從 QDs 表面脫落，使得 QDs的熒光發(fā)生淬滅[84]。

【參考文獻】：
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