發(fā)布時間：2021-07-23 19:18

　　背景與目的磁共振成像（MRI）因其組織分辨率高、軟組織對比度良好、無X線輻射損傷等優(yōu)點已成為移植干細胞的一種主要監(jiān)測方法。目前,利用MRI對移植細胞的示蹤主要有兩種方法,即磁標記直接成像和報告基因間接成像,其中磁標記法的主要缺陷在于細胞內(nèi)標記物會隨著細胞的分裂增殖而不斷降解,不能有效地對移植細胞實施長期示蹤,而MRI報告基因成像將報告基因整合到標記細胞基因組中,通過基因在細胞內(nèi)持續(xù)穩(wěn)定表達,從而實現(xiàn)MRI對移植細胞的縱向連續(xù)示蹤,有效地克服了磁標記成像的局限性。在眾多MRI報告基因中,鐵蛋白基因已成為研究熱點。鐵蛋白是一種內(nèi)源性儲鐵蛋白,分為蛋白殼和鐵核兩部分。蛋白殼由重鏈（H）和輕鏈（L）兩種亞基構(gòu)建而成,其重鏈多肽1（FTH1）具有亞鐵氧化酶的活性,具有誘導(dǎo)轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的表達并促進鐵吸收的能力,能引起MRI信號的改變,目前作為一種功能性磁共振報告基因已成為分子影像學研究的熱點。迄今,已有較多研究利用FTH1報告基因MR成像實現(xiàn)了對多種細胞的連續(xù)示蹤。在我們的前期研究中,利用慢病毒載體將FTH1報告基因轉(zhuǎn)入骨髓間充質(zhì)干細胞（MSCs）中,并將轉(zhuǎn)基因的MSCs誘導(dǎo)分化為神經(jīng)元樣細胞,發(fā)... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學重慶市

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

慢病毒載體及質(zhì)粒圖譜(A:慢病毒載體LV5B:包裝質(zhì)粒PG-p1-VSVGC:包裝質(zhì)粒PG-P2-REVD:包裝質(zhì)粒PG-P3-RRE)

蘇木素染液染色 10 分鐘，0sec，ddH2O 沖洗多余染液，晾干。顯微鏡下觀察染色情況。 表示，單因素方差分析用于分析不同處，當 P < 0.05 認為差異有統(tǒng)計學意義。酶切鑒定TH1 重組慢病毒載體,選擇的插入酶切位經(jīng)酶切出一個 1500-2000 bp 的片段后電

重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文CTGGAACTTCACAAACTGGCTACTGACAAGAATGATCCCCACTTATGTGACTTCATTGAGACGCATTACCTGAATGAGCAGGTGAAATCCATTAAAGAACTGGGTGACCACGTGACCAACTTACGCAAGATGGGAGCCCCTGAATCTGGCATGGCAGAATATCTCTTTGACAAGCACACCCTGGGACACGGTGATGAGAGCTAA結(jié)果顯示，序列正確。3.3 熒光顯微鏡觀察細胞綠色熒光的表達1μL LV5- NSE-FTH1 慢病毒感染 293T 細胞 48h，熒光顯微鏡下結(jié)果如圖 3A所示，0.1μL LV5- NSE-FTH1 慢病毒感染 293T 細胞 48h，熒光顯微鏡下的結(jié)果如圖 3B 所示, 0.01μL LV5- NSE-FTH1 慢病毒感染 293T 細胞 48h，熒光顯微鏡下的結(jié)果如圖 3C 所示。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]骨髓間充質(zhì)干細胞成神經(jīng)分化中的FTH1基因表達[J]. 鐘毅,蔡金華,賀小婭,秦勇,廖一凡.  第三軍醫(yī)大學學報. 2016(19)
[2]骨髓間充質(zhì)干細胞移植治療急性心肌梗死的多模態(tài)體內(nèi)示蹤分子成像[J]. 陳薈竹,夏睿,郭應(yīng)坤,侯江龍,張麗芝,李真林,艾華,寧剛,郜發(fā)寶.  四川大學學報(醫(yī)學版). 2014(06)



本文編號：3299881