幽門螺旋桿菌（H.pylori）是由慢性活動性胃炎患者胃粘膜組織中分離到的一種螺旋形、微厭氧革蘭陰性桿菌。幽門螺旋桿菌被認(rèn)為是慢性胃炎、胃十二指腸潰瘍、粘膜相關(guān)淋巴組織淋巴瘤和胃腺癌等疾病的重要致病因子。世界上約有一半的人口感染了幽門螺旋桿菌,并且世界衛(wèi)生組織將其列為Ⅰ類致癌因子。故早期、特異性診斷幽門螺旋桿菌,對幽門螺旋桿菌感染相關(guān)疾病的治療和預(yù)后具有重要意義�，F(xiàn)有的檢測方法無法實(shí)現(xiàn)對幽門螺旋桿菌的高靈敏檢測。因此,本課題設(shè)計(jì)了一種基于魯米諾的三元電化學(xué)發(fā)光納米球的新方法用于幽門螺旋桿菌的高靈敏檢測。本課題中,首次制備了一種新型的三元電化學(xué)發(fā)光納米球,該納米球包含了發(fā)光物質(zhì)魯米諾,共反應(yīng)劑聚乙烯亞胺和共反應(yīng)促進(jìn)劑氨化的苝系衍生物,由于聚乙烯亞胺-魯米諾分子內(nèi)的自增強(qiáng)共反應(yīng)和氨化的苝系衍生物對魯米諾/過氧化氫體系的共反應(yīng)促進(jìn)效果,這種新型的三元電化學(xué)發(fā)光納米球具有更強(qiáng)的電化學(xué)發(fā)光信號。將基于魯米諾的三元電化學(xué)發(fā)光納米球和靶物質(zhì)觸發(fā)的鏈置換反應(yīng)相結(jié)合,構(gòu)建了一種高靈敏無酶的生物傳感器去檢測幽門螺旋桿菌DNA。這種電化學(xué)發(fā)光生物傳感新方法已成功的應(yīng)用于幽門螺旋桿菌DNA的檢測,檢測范圍從1... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

構(gòu)建檢測幽門螺旋桿菌DNA電化學(xué)發(fā)光生物傳感器的原理圖（A）PTC-PEI-Lum/SP的制備（B）靶物質(zhì)觸發(fā)的鏈置換反應(yīng)擴(kuò)增的過程（C）PTC-PEI-Lum納米復(fù)合物的雙重電

圖 2 PTC-PEI-Lum 的合成過程Fig. 2 The schematic diagram of the synthesis of PTC-PEI-Lum.變性聚丙烯酰胺凝膠電泳（native PAGE）用非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）技術(shù)，驗(yàn)證了幽門螺桿菌驅(qū)動鏈置換反應(yīng)的可行性。將等比混合的 DNA 鏈 Q/F 和 Q/P/R鐘，然后緩慢降至室溫。電泳時將樣品注入 8%的聚丙烯酰胺凝緩沖液（90 mM Tris-boric acid，2 mM EDTA，pH8.4）中，電壓 1泳 60 分鐘。電泳完成后，應(yīng)用凝膠成像系統(tǒng)（Bio-Rad Laborator行了成像。物傳感器的組裝

能是由于 PEI 中缺少共軛基團(tuán)所致。曲線 b 表明魯米諾有 3 個特征性吸在 220 nm 處（屬于氨基 π-π*躍遷）、300 nm 和 348 nm 處（屬于氨基 與文獻(xiàn)[38]描述一致。PTC-NH2（曲線 c）在 496 nm 處出現(xiàn)了一條較寬的屬于苝核心的 π-π*躍遷[39]。與 PTC-NH2 的吸收光譜相比，PTC-PEI（曲的特征性吸收峰在 501 nm 附近略有紅移，這是由于 PEI 的助色基團(tuán)（TC-NH2的芳香環(huán)之間的共軛效應(yīng)所致。當(dāng)魯米諾交聯(lián)到 PTC-PEI 上面之-PEI-Lum（曲線 e）出現(xiàn)了四個特征性吸收峰，分別在 220 nm，296 nm，39 nm 處。有兩個峰從 220 nm 紅移到 222 nm、從 501 nm 紅移到 509 n紅移峰是由于魯米諾中芳香族環(huán)的 π 電子離域作用所致[40]。另外兩個峰移到 296 nm、從 347 nm 藍(lán)移到 343 nm，這兩個藍(lán)移峰主要是由于 PT米諾之間的靜電相互作用引起的。以上這些結(jié)果證明了 PTC-PEI-Lum 納料的成功合成。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]硫化鎘量子點(diǎn)對三聯(lián)吡啶釕電化學(xué)發(fā)光的增敏作用及用于鄰苯二酚的檢測[J]. 王明麗,孫亞楠,郭佳怡,楊學(xué)梅,楊敏麗.  分析化學(xué). 2018(05)



本文編號：3282018