目的:了解結(jié)核分枝桿菌耐利奈唑胺相關(guān)基因在肺結(jié)核臨床分離株突變的情況,為今后耐多藥結(jié)核病的治療提供參考。方法:收集未曾使用過利奈唑胺的肺結(jié)核患者痰標(biāo)本,進(jìn)行結(jié)核菌培養(yǎng)及藥物敏感試驗,獲得206例相應(yīng)的敏感及耐藥菌株,使用CTAB法提取結(jié)核分枝桿菌DNA,PCR技術(shù)擴(kuò)增rplD、23S rRNA及rplC目的基因,進(jìn)行測序,通過與H37Rv標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行對比,獲得相關(guān)基因的突變信息。結(jié)果:206例臨床分離株中,敏感菌株106株,單耐藥菌株24株,多耐藥菌株14株,耐利福平菌株8株,耐多藥菌株50株,廣泛耐藥菌株4株。206例臨床分離株經(jīng)擴(kuò)增與測序分析,發(fā)現(xiàn)21例出現(xiàn)rplD基因突變,其中20例為G236A突變,1例為同義C381T突變。1例在23S rRNA基因中出現(xiàn)C344T突變。結(jié)論:在未使用利奈唑胺前,在多例臨床分離株中檢測到了rplD及23S rRNA基因突變,其中rplD基因突變頻率為9.7%,23S rRNA基因突變頻率為0.5%,未檢測到rplC基因突變,提示rplD基因G236A突變與利奈唑胺天然突變有一定關(guān)系。 

【文章來源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

ND-1000檢測結(jié)核分枝桿菌DNA濃度

.5 μL I 型 Gold view 后搖晃使之分布均勻，放進(jìn)干燥的釘齒插入溶液中，靜置半小時后水平取出制孔器。驟中制好瓊脂糖凝膠緩慢置于充滿 0.5×TBE 的電泳槽情況在凝膠上樣孔中加入 2 μL PCR 產(chǎn)物或者 2.5 μL 150 v，等標(biāo)本出孔后調(diào)整電壓至 130 v 電泳 1 h。凝膠放置于凝膠成像儀內(nèi)，通過成像儀顯像后留取照片梯度聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）確定最適退火溫度度聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增 rplD 基因引物計算出的解鏈溫度（TM 值）調(diào)整聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) 50 ℃，上限設(shè)置為 60 ℃，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增 rplD

查看凝膠電泳圖（圖3），在 3000 bp 左右位置可見明亮的目的條帶，在 1000 bp 以內(nèi)可見一非目的條帶產(chǎn)物，且隨著溫度增加逐漸消失，可見聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)溫度為 59.6 ℃的孔處的非目

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]利奈唑胺聯(lián)合方案治療耐多藥結(jié)核病效果及不良反應(yīng)研究[J]. 付道芳,梁宗安.  傳染病信息. 2019(01)
[2]利奈唑胺與抗結(jié)核藥物聯(lián)用對患者重癥結(jié)核性腦膜炎的療效及其對腦脊液CRP、NSE水平改善的影響[J]. 劉家斌,楊云珠,羅葉婷.  抗感染藥學(xué). 2018(11)
[3]利奈唑胺治療耐多藥肺結(jié)核臨床療效觀察及藥學(xué)分析[J]. 王方.  中國現(xiàn)代醫(yī)藥雜志. 2018(09)
[4]四聯(lián)抗結(jié)核藥物聯(lián)合利奈唑胺、莫西沙星對難治性結(jié)核性腦膜炎患者CSF細(xì)胞學(xué)、NSE和NGF及其受體的影響[J]. 胡清亮,張綠浪.  海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報. 2018(15)
[5]利奈唑胺聯(lián)合治療非結(jié)核分枝桿菌肺病的近期療效與安全性分析[J]. 張權(quán)武.  臨床醫(yī)學(xué)研究與實踐. 2018(02)
[6]廣泛耐藥結(jié)核分枝桿菌對利奈唑胺的耐藥情況分析[J]. 宗兆婧,荊瑋,霍鳳敏,尚媛媛,梁倩,李云絮,逄宇,黃海榮.  新發(fā)傳染病電子雜志. 2017(03)
[7]體外誘導(dǎo)獲取對利奈唑胺耐藥的結(jié)核分枝桿菌菌株及其穩(wěn)定性研究[J]. 胡明豪,王彬,付雷,徐建,陸宇.  中國防癆雜志. 2017 (04)
[8]耐藥結(jié)核病的流行趨勢[J]. 李拯民,王甦民.  中華結(jié)核和呼吸雜志. 2000(02)



本文編號：3228170