研究背景:膿毒癥是由感染引起的全身炎癥反應(yīng)綜合征,臨床上可發(fā)展為嚴(yán)重膿毒癥、膿毒癥休克和多器官障礙綜合征,死亡率高,是ICU患者死亡的主要原因之一。嚴(yán)重膿毒癥發(fā)生時(shí),可出現(xiàn)多個(gè)器官的功能損傷,形成多器官功能障礙,其中腎臟的損傷較為常見(jiàn),發(fā)展成為急性腎損傷,膿毒癥誘導(dǎo)的急性腎損傷大約占了ICU中急性腎損傷的50%。miRNAs是一類非編碼小分子RNA,其通過(guò)特異性識(shí)別靶基因mRNA來(lái)抑制蛋白翻譯或誘導(dǎo)mRNA的降解,從而在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因的表達(dá)。miRNA-21參與多個(gè)細(xì)胞進(jìn)程,如:癌細(xì)胞的增長(zhǎng)和侵襲,心肌缺血性損傷,上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化,缺血性腎損傷等。然在膿毒癥急性腎損傷方面的研究報(bào)道卻比較少,故本研究試探索miRNA-21與膿毒癥急性腎損傷的關(guān)系。研究目的:1.探討脂多糖刺激的人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞在不同時(shí)間點(diǎn)miR-21及炎癥因子的表達(dá);2.探討被上調(diào)的miR-21在LPS刺激的人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)中所發(fā)揮的作用;3.初步探索被上調(diào)的miR-21在LPS刺激的人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)中發(fā)揮作用的機(jī)制。研究方法:1.構(gòu)建HK-2細(xì)胞（人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞）的... 

【文章來(lái)源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁(yè)數(shù)】：70 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２：?ＬＰＳ（１０ｕｇ／ｍｌ）刺激ＨＫ－２細(xì)胞４、８、１２小時(shí)后ｍｉＲ－２１的相對(duì)表達(dá)水平（ＲＴ－ｑＰＣＲ檢??測(cè)細(xì)胞ｍＲＮＡ）??

蛋白的表達(dá)水平均上升，與ＬＰＳ（?１０ｕｇ／ｍｌ）刺激ＨＫ－２細(xì)胞后各時(shí)間點(diǎn)ＩＬ－６?ｍＲＮＡ??的測(cè)量結(jié)果一致，說(shuō)明用ＨＫ－２細(xì)胞建立ＬＰＳ誘導(dǎo)的膿毒癥急性腎損傷模型成??功。見(jiàn)圖３。??外‘’：、顧ｉｒ?＾■＊??＊?；?＾Ｋｍｍｍ?ｍｍｍｍ?＇＇ｍａｒｎｍ＾??■§?４??＾?１?＊＊?＊Ｓ＊ｆ＊?★??ｔ２－?Ｍ?＂?１??ｊｉｌ＿Ｎ＿?＿??２?ｃｏｎｔｒｏｌ?１０ｕｇ－４ｈ?１０ｕｇ－８ｈ?１０ｕｇ－１２ｈ?１０ｕｇ－２４ｈ??圖３：?ＬＰＳ（１０ｕｇ／ｍｌ）刺激ＨＫ－２細(xì)胞４、８、１２小時(shí)后ＩＬ－６蛋白的相對(duì)表達(dá)水平。Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ??分析條帶，上圖為ＩＬ－６蛋白，下圖為內(nèi)參ＧＡＰＤＨ蛋白。（蛋白上樣量依次為對(duì)照組，４、８、??１２、２４小時(shí)組）??Ｆｉｇｕｒｅ?３：?Ｒｅｌａｔｉｖｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｌｅｖｅｌｓ?ｏｆ?ＩＬ－６?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｉｎ?ＨＫ－２?ｃｅｌｌｓ?ａｆｔｅｒ?ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ?ｗｉｔｈ?ＬＰＳ?（１０??ｕｇ?／?ｍｌ）?ｆｏｒ?４，?８?ａｎｄ?１２?ｈｏｕｒｓ．?Ｔｈｅ?ｂａｎｄ?ｏｆ?ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ?ａｎａｌｙｓｉｓ－ｔｈｅ?ｕｐｐｅｒ?ｐａｎｅｌ?ｆｏｒ?ｔｈｅ?ＩＬ－６??ｐｒｏｔｅｉｎ，?ｔｈｅ?ｐｉｃｔｕｒｅ?ｂｅｌｏｗ?ｉｓ?ｔｈｅ?ＧＡＰＤＨ?ｐｒｏｔｅｉｎ?．（ｐｒｏｔｅｉｎ?ｌｏａｄｉｎｇ?ｓａｍｐｌｅｓ?ｆｏｌｌｏｗｅｄ?ｂｙ?ｔｈｅ??２４??

?為１）而言，為１７．０７±１．４０，?ｐ值為０．００３，小于０．０１，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說(shuō)明??轉(zhuǎn)染成功，以此轉(zhuǎn)染條件轉(zhuǎn)染ＨＫ－２細(xì)胞后，ｍｉＲ－２１的表達(dá)量明顯升高。見(jiàn)圖４。??￡?２〇ｉ?★★??〇??邕１５－??０）??Ｓ?１０－??ａ：??Ｅ??？?５＿?？靜??２?〇Ｌｎ＾?，???ｍｉＲ－２１?ＮＣ?ｍｉＲ－２１?ｍｉｍｉｃｓ??圖４：轉(zhuǎn)染效率：分別轉(zhuǎn)染ｍｉＲ－２１?ｍｉｍｉｃｓ（５０?ｎＭ）及其陰性對(duì)照物（５０?ｎＭ）?（ｍｉＲ－２１?ＮＣ組）２４ｈ??后，ＲＴ－ｑＰＣＲ檢測(cè)細(xì)胞ｍｉＲ－２１的相對(duì)表達(dá)水平??Ｆｉｇｕｒｅ?４：?Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ?ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ：?Ｔｈｅ?ｒｅｌａｔｉｖｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｌｅｖｅｌｓ?ｏｆ?ｍｉＲ－２１?ａｆｔｅｒ?ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ?ｗｉｔｈ??ｍｉＲ－２１?ｍｉｍｉｃｓ?（５０?ｎＭ）?ａｎｄ?ｉｔｓ?ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ?（５０?ｎＭ）?（ｍｉＲ－２１?ＮＣ）?ｆｏｒ?２４?ｈ．??注：與轉(zhuǎn)染ｍｉＲ－２１?ＮＣ組（設(shè)為１）相比，＊＊表示Ｐ＜０．〇１。??２？上調(diào)ｍｉＲ－２１對(duì)ＬＰＳ誘導(dǎo)ＨＫ－２細(xì)胞產(chǎn)生ＩＬ－６?ｍＲＮＡ的影響??轉(zhuǎn)染組ＩＬ－６的表達(dá)相對(duì)于對(duì)照組（設(shè)為１）而言，為０．６８士０．０７?（Ｐ＝０．０１７），Ｐ＜０．０５，??差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這表明過(guò)表達(dá)ｍｉＲ－２１能下調(diào)ＬＰＳ誘導(dǎo)ＨＫ－２細(xì)胞ＩＬ－６的??表達(dá)，ｍｉＲ－２１在其中發(fā)揮著抗炎癥的作用。見(jiàn)圖５??３７??


本文編號(hào)：3218371