結(jié)核病及耐藥結(jié)核病的早發(fā)現(xiàn)、早治療是提高結(jié)核病治愈率、降低死亡率的關(guān)鍵。然而基于固體培養(yǎng)的傳統(tǒng)診斷方法檢測周期長,一般為1-2個月,因此可能耽誤患者的最佳治療時機(jī)。隨著分子生物學(xué)的迅速發(fā)展,出現(xiàn)了一批結(jié)核菌及耐藥結(jié)核菌的快速基因型診斷技術(shù);但是利用現(xiàn)有的異煙肼、鏈霉素相關(guān)耐藥基因的常見突變位點(diǎn)（kat G、inh A、rps L、rrs）對臨床異煙肼、鏈霉素耐藥結(jié)核菌的檢出率僅為60%⁸0%;因此發(fā)現(xiàn)新的耐藥位點(diǎn)是提高基因型診斷檢出率的基礎(chǔ)和依據(jù),并為改進(jìn)和研發(fā)新的基因型診斷工具奠定基礎(chǔ),同時對全面研究耐異煙肼/鏈霉素結(jié)核分枝桿菌的耐藥分子機(jī)制,以及發(fā)現(xiàn)新的藥物作用靶點(diǎn)和研制新的抗結(jié)核藥物具有深遠(yuǎn)意義。為此本研究首先評估基因型診斷技術(shù)的準(zhǔn)確性,其次對預(yù)測出的新的耐藥位點(diǎn)進(jìn)行鑒定,最后通過控制單因素（藥物）變量法,成功構(gòu)建體外誘導(dǎo)耐異煙肼/鏈霉素的結(jié)核分枝桿菌模型,從而排除環(huán)境等因素對結(jié)核菌堿基突變的影響,達(dá)到有效篩查新耐藥位點(diǎn)的目的。本研究的主要內(nèi)容及研究結(jié)果如下:1、為評估實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有基因型診斷技術(shù)的準(zhǔn)確性及最低檢出限,并為制定合理的診斷路徑提供依據(jù)。本試驗(yàn)對已知... 

【文章來源】：華南理工大學(xué)廣東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：96 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮寫詞表
第一章 緒論
    1.1 結(jié)核病概述
        1.1.1 結(jié)核病危害及流行趨勢
        1.1.2 結(jié)核分枝桿菌的感染
        1.1.3 人畜共患結(jié)核病的防治
    1.2 結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室診斷方法
        1.2.1 傳統(tǒng)細(xì)菌學(xué)診斷方法
        1.2.2 分子生物學(xué)診斷方法
        1.2.3 免疫學(xué)診斷方法
    1.3 耐藥結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室診斷方法
        1.3.1 傳統(tǒng)比例法藥敏試驗(yàn)
        1.3.2 BACTEC液體培養(yǎng)法
        1.3.3 分子生物學(xué)快速診斷方法
    1.4 結(jié)核分枝桿菌耐藥機(jī)制
        1.4.1 異煙肼耐藥的分子機(jī)制
        1.4.2 鏈霉素耐藥的分子機(jī)制
    1.5 本課題的研究意義及主要內(nèi)容
第二章 基因型診斷技術(shù)檢測結(jié)核菌及其耐藥性的應(yīng)用評估
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備
        2.2.1 主要儀器設(shè)備
        2.2.2 主要試劑
        2.2.3 培養(yǎng)基和溶液配制
    2.3 實(shí)驗(yàn)流程
    2.4 實(shí)驗(yàn)方法
        2.4.1 菌株的擴(kuò)增
        2.4.2 實(shí)驗(yàn)標(biāo)本的準(zhǔn)備
        2.4.3 羅氏固體培養(yǎng)
        2.4.4 基因芯片檢測方法
        2.4.5 XpertMTB/RIF檢測方法
        2.4.6 GenoType?MTBDRplus檢測方法
    2.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.5.1 羅氏固體培養(yǎng)檢測結(jié)果
        2.5.2 基因芯片檢測結(jié)果
        2.5.3 XpertMTB/RIF檢測結(jié)果
        2.5.4 GenoType?MTBDRplus檢測結(jié)果
    2.6 討論
    2.7 本章小結(jié)
第三章 異煙肼/鏈霉素耐藥結(jié)核菌相關(guān)突變位點(diǎn)的鑒定
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備
        3.2.1 主要儀器設(shè)備
        3.2.2 主要試劑
        3.2.3 培養(yǎng)基和常用溶液配制
    3.3 實(shí)驗(yàn)流程
    3.4 實(shí)驗(yàn)方法
        3.4.1 結(jié)核分枝桿菌的擴(kuò)增
        3.4.2 基因組DNA的提取
        3.4.3 PCR擴(kuò)增
        3.4.4 瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR擴(kuò)增產(chǎn)物
        3.4.5 擴(kuò)增產(chǎn)物序列分析
    3.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.5.1 基因組DNA提取
        3.5.2 異煙肼耐藥結(jié)核菌相關(guān)基因的序列分析
        3.5.3 鏈霉素耐藥結(jié)核菌相關(guān)基因的序列分析
    3.6 討論
    3.7 本章小結(jié)
第四章 建立體外誘導(dǎo)耐異煙肼/鏈霉素結(jié)核分枝桿菌模型及耐藥位點(diǎn)篩查
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備
        4.2.1 主要儀器設(shè)備
        4.2.2 主要試劑
        4.2.3 培養(yǎng)基和常用溶液配制
    4.3 實(shí)驗(yàn)流程
    4.4 實(shí)驗(yàn)方法
        4.4.1 標(biāo)準(zhǔn)菌株H37Rv體外誘導(dǎo)耐藥試驗(yàn)
        4.4.2 傳統(tǒng)比例法藥敏試驗(yàn)
        4.4.3 誘導(dǎo)耐藥株及未誘導(dǎo)對照株基因組DNA提取
        4.4.4 瓊脂糖凝膠電泳分析基因組DNA的純度和完整性
        4.4.5 Nanodrop檢測基因組DNA的純度和濃度
    4.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.5.1 不同代次不同藥物濃度培養(yǎng)基上菌株的生長情況
        4.5.2 誘導(dǎo)耐藥株的藥敏試驗(yàn)結(jié)果
        4.5.3 基因組DNA質(zhì)量檢測
        4.5.4.所有的單核苷酸多態(tài)性（SNPs）位點(diǎn)分布
        4.5.5 非同義SNPs位點(diǎn)分布
    4.6 討論
    4.7 本章小結(jié)
結(jié)論與展望
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀碩士學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
答辯委員會對論文的評定意見


【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號：3215027