目的:30年余來,艾滋�。ˋcquired Immunodeficiency Syndrome,AIDS）在全世界范圍內(nèi)蔓延,已成為危害人類健康的重大傳染病之一。雖然高效聯(lián)合抗病毒治療（Highly Active Anti-Retroviral Therapy,HAART）已被廣泛應(yīng)用于HIV感染的治療,但HAART治療需要每日服藥,給患者帶了一定的精神和經(jīng)濟負擔(dān),另外HAART帶來的潛在耐藥風(fēng)險,及藥物的不良反應(yīng)也影響抗病毒治療藥物的應(yīng)用,而且由于病毒儲存庫的存在,即使長期服藥最好的抗病毒藥物也不能清除HIV,不達到治愈的目的,因此有效的抗HIV疫苗仍是有望根治HIV的關(guān)鍵。迄今為止,雖然有多項HIV疫苗項目已推進到臨床實驗階段,但均沒有取得可喜的結(jié)果,在長期HIV疫苗研究過程中,研究者們分離出許多高效廣譜的抗HIV中和抗體,多項基于這些抗體或抗體衍生物的被動免疫策略在HIV預(yù)防和治療上具有一定的效果。雖然相比于抗病毒藥物,抗體發(fā)揮抗病毒作用時效較長,不需要日日給藥,但仍需要多次給予抗體,才能在體內(nèi)達到維持?jǐn)?shù)周的有效抗病毒濃度。因此如何保證體內(nèi),尤其是感染部位（黏膜）長期存在足夠的有... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖1.雙抗性篩選的乳酸桿菌表達質(zhì)粒構(gòu)建策略

中國醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文（2）酶切：10X 緩沖液 1.1 5ul，內(nèi)切酶 ApaI 1ul，膠回收后 PCR 產(chǎn)plp0373_AmyA（Em/Amp） 1ug，加水補充到總體積 50ul。25℃酶切 1 小鐘后，加入 1ul NdeI,37℃酶切 1 小時 30 分鐘，電泳鑒定，膠回收 DNA 片試劑盒說明書）。（3）T4 連接：目的片段和骨架質(zhì)粒摩爾比為 50fmol/10fmol,T4 連接酶（1U5X 緩沖液 4ul，其余用無酶水補充。16℃過夜連接。（4）質(zhì)粒轉(zhuǎn)化：同上（2.3.2）

桿菌表達質(zhì)粒的改造。A.從 pUC19 載體擴增出的子的序列長度為 1039bp，第一/二泳道均為氨芐青泳 marker。B.改造后質(zhì)粒與原質(zhì)粒經(jīng)雙酶切后電泳經(jīng) SalI 和 EcoRI 雙酶切后出現(xiàn)的 6.8kb 和 1.3kb 兩性質(zhì)粒經(jīng) SalI 和 EcoRI 雙酶切后出現(xiàn)的 5.7kb 和 為未經(jīng)酶切的雙抗性質(zhì)粒和單抗性質(zhì)粒。第三泳道霉素單抗性質(zhì)粒。D.改造后的氨芐青霉素和紅霉啟動子和同源信號肽的乳酸桿菌表達質(zhì)粒外源蛋白信號肽 lp0373 是 WCFS1 菌株同源的信號的啟動子 PsppA 替換為 WCFS1 菌株同源的啟動因構(gòu)建了含有 WCFS1 菌株同源啟動子 pLDHL，PCR 擴增質(zhì)粒中的 pLdhl 片段（圖 4.A），片

【參考文獻】：
期刊論文
[1]不同質(zhì)粒電轉(zhuǎn)三種乳酸菌的比較研究[J]. 王巧惠,王光強,宋馨,夏永軍,曹利瑞,艾連中.  工業(yè)微生物. 2016(01)



本文編號：3208837