發(fā)布時(shí)間：2021-05-27 10:12

　　目的:利用安全高效的MRI分子影像技術(shù)早期診斷肝細(xì)胞癌對(duì)降低其死亡率具有重要意義。本研究使用由甲胎蛋白（AFP）啟動(dòng)子啟動(dòng)的鐵蛋白基因（Fth）作為MRI報(bào)告基因,以陽(yáng)離子材料作為基因載體,轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞,與正常細(xì)胞產(chǎn)生MR對(duì)比成像,在分子水平實(shí)現(xiàn)肝癌細(xì)胞的影像診斷。材料與方法:合成陽(yáng)離子聚合物PEI-β-CD（PC）作為載體;通過(guò)凝膠電泳阻滯、粒徑測(cè)量及透射電子顯微鏡等表征實(shí)驗(yàn)確定PC與質(zhì)粒DNA（pDNA）復(fù)合的最佳氮磷比（N/P）;通過(guò)熒光顯微鏡及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率;利用蛋白免疫印跡、免疫熒光及普魯士藍(lán)染色實(shí)驗(yàn)證明由鐵蛋白過(guò)表達(dá)所引起的細(xì)胞內(nèi)鐵聚集;通過(guò)體外細(xì)胞MRI掃描檢測(cè)對(duì)比成像效果。結(jié)果:經(jīng)環(huán)糊精（CD）修飾的陽(yáng)離子聚合物PC在濃度為100μg/ml時(shí)細(xì)胞存活率接近 95%,與高分子量 PEI（HMW PEI,PEI25kD）及陽(yáng)離子脂質(zhì)體 Lipofectamine2000（Lipo）相比毒性明顯降低;PC在N/P為50時(shí)可緊密復(fù)合pDNA,并形成具有適宜理化性質(zhì)的納米體系有助其順利被細(xì)胞攝取:粒徑143.25±2.49nm,多分散性指數(shù)0.211±0.02,Zeta電... 

【文章來(lái)源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：63 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
Abstract
第1章 緒論
第2章 陽(yáng)離子載體/質(zhì)粒DNA的制備及理化性質(zhì)研究
    2.1 引言
    2.2 試劑與儀器
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 陽(yáng)離子聚合物的合成與表征
        2.3.2 陽(yáng)離子載體/pDNA轉(zhuǎn)染體系的制備
        2.3.3 陽(yáng)離子載體/pDNA轉(zhuǎn)染體系理化性質(zhì)的表征
        2.3.4 數(shù)據(jù)分析
    2.4 結(jié)果
        2.4.1 陽(yáng)離子聚合物的合成
        2.4.2 陽(yáng)離子聚合物的氫譜表征
        2.4.3 質(zhì)粒及陽(yáng)離子材料/pDNA的制備
        2.4.4 陽(yáng)離子載體/pDNA轉(zhuǎn)染體系的表征
    2.5 討論
    2.6 本章小結(jié)
第3章 陽(yáng)離子載體/質(zhì)粒DNA的細(xì)胞毒性及轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)研究
    3.1 引言
    3.2 試劑與儀器
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 體外細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)
        3.3.2 體外轉(zhuǎn)染綠色熒光蛋白基因
    3.4 結(jié)果
        3.4.1 體外細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)
        3.4.2 體外細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率評(píng)價(jià)
    3.5 討論
    3.6 本章小結(jié)
第4章 陽(yáng)離子載體/鐵蛋白基因用于肝細(xì)胞癌的MR分子影像研究
    4.1 引言
    4.2 試劑與儀器
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 鐵蛋白和轉(zhuǎn)鐵蛋白受體表達(dá)檢測(cè)
        4.3.2 細(xì)胞內(nèi)鐵染色
        4.3.3 體外細(xì)胞MRI檢測(cè)
    4.4 結(jié)果
        4.4.1 Western Blot法檢測(cè)鐵蛋白的表達(dá)
        4.4.2 免疫熒光法檢測(cè)轉(zhuǎn)鐵蛋白受體
        4.4.3 普魯士藍(lán)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)鐵
        4.4.4 MRI對(duì)比成像
    4.5 討論
    4.6 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間主要的研究成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]靶向磁共振成像造影劑的合成及其在癌癥早期診斷中的應(yīng)用[D]. 張偉祿.華東師范大學(xué) 2011

碩士論文
[1]葉酸靶向納米復(fù)合物的制備及體內(nèi)外MR成像實(shí)驗(yàn)研究[D]. 王中領(lǐng).蘇州大學(xué) 2011



本文編號(hào)：3207384