線粒體轉(zhuǎn)錄因子A（TFAM）是HMG蛋白家族成員,目前已知除了可以調(diào)控線粒體DNA（mtDNA）轉(zhuǎn)錄活性、參與細(xì)胞凋亡外,還作為線粒體損傷模式分子（DAMPs）激活炎癥反應(yīng)和免疫反應(yīng)。有研究顯示,電離輻射通過激活TFAM的表達(dá)促進(jìn)線粒體新生和再分布,保證線粒體生物發(fā)生的正常運(yùn)行。盡管電離輻射可以激活腫瘤細(xì)胞的線粒體生物發(fā)生,但相應(yīng)的分子調(diào)控機(jī)制卻未見報(bào)道。本研究以TFAM介導(dǎo)的線粒體生物發(fā)生為核心,探究TFAM對(duì)腫瘤細(xì)胞輻射敏感性的影響,以期為優(yōu)化腫瘤放療方案提供實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)。第一部分:線粒體轉(zhuǎn)錄因子A的表達(dá)對(duì)腫瘤細(xì)胞輻射敏感性的影響及相關(guān)機(jī)制研究線粒體是電離輻射的重要靶點(diǎn),由于線粒體DNA的特殊結(jié)構(gòu)和功能,其更容易受到電離輻射的損傷。TFAM作為線粒體DNA重要的轉(zhuǎn)錄和調(diào)控因子,能夠與線粒體DNA結(jié)合,從而調(diào)控線粒體生物發(fā)生。我們的實(shí)驗(yàn)以TFAM介導(dǎo)的線粒體生物發(fā)生為核心,揭示電離輻射作用下線粒體生物發(fā)生對(duì)腫瘤細(xì)胞輻射敏感性的調(diào)控機(jī)制。實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),電離輻射能夠激活TFAM mRNA和蛋白表達(dá)。為了進(jìn)一步探究TFAM對(duì)腫瘤細(xì)胞輻射敏感性的影響,我們構(gòu)建了TFAM敲除的穩(wěn)定細(xì)胞系。實(shí)... 

【文章來源】：中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)安徽省 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：102 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 緒論
    1.1 線粒體及線粒體生物發(fā)生的概述
        1.1.1 線粒體的結(jié)構(gòu)
        1.1.2 線粒體的功能
        1.1.3 調(diào)控線粒體生物發(fā)生的相關(guān)蛋白
        1.1.4 腫瘤的發(fā)生發(fā)展與線粒體生物發(fā)生的關(guān)系
    1.2 電離輻射對(duì)線粒體生物發(fā)生的影響
    1.3 線粒體轉(zhuǎn)錄因子A的結(jié)構(gòu)和功能
        1.3.1 線粒體轉(zhuǎn)錄因子A的結(jié)構(gòu)
        1.3.2 線粒體轉(zhuǎn)錄因子A的功能
    1.4 腫瘤的發(fā)生發(fā)展與線粒體轉(zhuǎn)錄因子A的關(guān)系
    1.5 電離輻射對(duì)線粒體轉(zhuǎn)錄因子A的影響
    1.6 線粒體轉(zhuǎn)錄因子A在腫瘤微環(huán)境中的作用
    1.7 本研究的背景、意義、內(nèi)容
        1.7.1 研究的背景和意義
        1.7.2 研究內(nèi)容
第二章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料和試劑
        2.1.2 主要儀器設(shè)備
        2.1.3 溶液配制
    2.2 方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 細(xì)胞輻照
        2.2.3 熒光定量PCR
        2.2.4 蛋白質(zhì)印跡法
        2.2.5 細(xì)胞增殖檢測
        2.2.6 細(xì)胞凋亡檢測
        2.2.7 細(xì)胞克隆存活檢測
        2.2.8 線粒體DNA拷貝數(shù)檢測
        2.2.9 穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系的建立
        2.2.10 mRNA和蛋白質(zhì)穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)
        2.2.11 RNA-蛋白質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)
        2.2.12 免疫熒光
        2.2.13 RNA干擾
        2.2.14 核質(zhì)分離實(shí)驗(yàn)
        2.2.15 免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)
        2.2.16 線粒體抽提
        2.2.17 突變質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.2.18 統(tǒng)計(jì)分析
第三章 線粒體轉(zhuǎn)錄因子A對(duì)腫瘤細(xì)胞輻射敏感性的影響
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.2.1 電離輻射激活TFAM的表達(dá)
        3.2.2 TFAM敲除細(xì)胞株的建立
        3.2.3 TFAM對(duì)線粒體DNA拷貝數(shù)的影響
        3.2.4 TFAM對(duì)細(xì)胞增殖情況的影響
        3.2.5 TFAM對(duì)細(xì)胞克隆存活的影響
        3.2.6 TFAM對(duì)細(xì)胞凋亡的影響
    3.3 討論
第四章 電離輻射誘導(dǎo)線粒體轉(zhuǎn)錄因子A表達(dá)的相關(guān)機(jī)制研究
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.2.1 電離輻射誘導(dǎo)ATM/p38的活化對(duì)TFAM的影響
        4.2.2 RNA結(jié)合蛋白HuR對(duì)TFAM表達(dá)的影響
        4.2.3 HuR對(duì)TFAM mRNA穩(wěn)定性的影響
        4.2.4 p38對(duì)TFAM mRNA穩(wěn)定性的調(diào)控
    4.3 討論
第五章 電離輻射誘導(dǎo)線粒體轉(zhuǎn)錄因子A的釋放
    5.1 引言
    5.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.2.1 電離輻射及DJ-1的缺失對(duì)TFAM釋放的影響
        5.2.2 TFAM的釋放對(duì)腫瘤細(xì)胞的影響
    5.3 討論
第六章 DJ-1誘導(dǎo)線粒體轉(zhuǎn)錄因子A釋放的相關(guān)機(jī)制研究
    6.1 引言
    6.2. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        6.2.1 P53在DJ-IsiRNAs誘導(dǎo)TFAM釋放中的作用
        6.2.2 p53介導(dǎo)非轉(zhuǎn)錄依賴的細(xì)胞凋亡對(duì)DJ-1敲低誘導(dǎo)TFAM分泌的影響
        6.2.3 TFAM的乙�；瘜�(duì)TFAM分泌的影響
    6.3 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與取得的其他研究成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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