研究背景:近幾年來,頻繁暴發(fā)的呼吸道傳染病疫情嚴重危害公眾健康。2005年暴發(fā)的H5N1禽流感,波及17個省市,造成13人死亡。2009年暴發(fā)自墨西哥的甲型H1N1流感疫情造成全球恐慌。2013年暴發(fā)于中國東部的H7N9禽流感疫情再次引起了全世界的關注。此外,近年來在我國流行的7型、14型和55型腺病毒已造成聚集性暴發(fā)疫情。呼吸道傳染病現(xiàn)場檢測技術的不足,嚴重影響疫情應急處置的時效性和針對性。目的和意義:快速檢測呼吸道傳染病病原體是及時發(fā)現(xiàn)傳染源、采取有效隔離措施,防止疫情蔓延的關鍵,是呼吸道傳染病疫情科學防控的迫切需要。本研究擬建立基于微流控芯片和等溫擴增技術的的呼吸道病原體現(xiàn)場快速檢測技術,解決當前呼吸道傳染病現(xiàn)場檢測技術缺乏,難以滿足呼吸道癥候群主要病原篩查的問題;為及時準確治療和隔離傳染源,實現(xiàn)疫情的及時有效科學防控提供技術支持。研究方法:首先,在GenBank中查找甲型H1、H3、H5、乙型流感病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒以及副流感病毒的保守序列,設計其特異性LAMP引物,根據(jù)擴增效果篩選出最佳引物,建立并優(yōu)化常規(guī)熒光LAMP體系。其次,設計陣列化微流控芯片,研究等溫擴增用酶... 

【文章來源】：廣西醫(yī)科大學廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：101 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
個人簡歷
摘要
ABSTRACT
一、前言
    1 呼吸道傳染病概述
        1.1 流感病毒
        1.2 呼吸道合胞病毒
        1.3 副流感病毒
        1.4 腺病毒
    2 常規(guī)檢測方法
        2.1 病毒的分離培養(yǎng)鑒定
        2.2 免疫學檢測方法
        2.3 分子生物學檢測方法
    3 環(huán)介導等溫擴增技術
        3.1 LAMP技術引物
        3.2 LAMP技術原理
        3.3 LAMP技術研究現(xiàn)狀
    4 微流控芯片技術
    5 主要研究內容與意義
二、常規(guī)等溫擴增熒光檢測技術的建立及評價
    1 實驗材料
        1.1 毒株及分離培養(yǎng)材料
        1.2 核酸提取、熒光定量PCR及LAMP擴增實驗材料
        1.3 實驗儀器
    2 實驗方法
        2.1 病原體核酸的提取
        2.2 熒光定量PCR方法驗證病毒
        2.3 相關病毒質粒擴大及提取實驗
        2.4 LAMP引物設計及篩選
        2.5 熒光LAMP反應體系優(yōu)化
        2.6 特異性評價實驗
        2.7 靈敏度評價
    3 結果與討論
        3.1 病原體熒光定量PCR檢測
        3.2 LAMP引物篩選
        3.3 LAMP反應體系優(yōu)化
        3.4 特異性評價
        3.5 靈敏度評價
    4 小結
三、微流控等溫擴增熒光檢測技術建立及對呼吸道病毒的檢測效果評價
    1 實驗材料
        1.1 微流控熒光LAMP實驗材料
        1.2 實驗儀器
    2 實驗方法
        2.1 微流控等溫擴增熒光檢測方法的建立及優(yōu)化
        2.2 微流控等溫擴增熒光檢測特異性評價實驗
        2.3 微流控等溫擴增熒光檢測靈敏度評價實驗
    3 結果與討論
        3.1 微流控等溫擴增熒光檢測方法體系優(yōu)化
        3.2 微流控等溫擴增熒光檢測方法的特異性
        3.3 微流控等溫擴增熒光檢測方法的靈敏度
        3.4 與熒光定量PCR方法靈敏度的對比結果
    4 小結
四、結論
參考文獻
附錄
綜述
    參考文獻
致謝
攻讀學位期間取得的學術論文


【參考文獻】：
期刊論文
[1]成都地區(qū)成人急性呼吸道感染病例中副流感病毒檢出情況分析[J]. 李興橋,劉雪薇,周濤,裴曉方.  四川大學學報(醫(yī)學版). 2017(06)
[2]流感百年:20世紀流感大流行的回顧與啟示[J]. 曾祥興,李康生.  醫(yī)學與社會. 2010(11)
[3]ELISA技術在禽流感診斷研究中的應用[J]. 韓慶功,崔艷紅,張智勇.  生物技術通報. 2008(06)
[4]小鼠抗兔IgG單克隆抗體的制備與應用[J]. 張葵,汪濤,李琦,莊然,宋朝君,李永明,金伯泉.  標記免疫分析與臨床. 2008(01)
[5]NASBA——一種新型禽流感病毒檢測方法[J]. 劉樂庭,劉爽,封燕蕓,陳建國,于常海.  中國生物工程雜志. 2005(11)
[6]LAMP法鑒定奶牛早期胚胎性別的效果研究[J]. 黃金明,熊杰,柳堯波,游偉.  家畜生態(tài)學報. 2005(01)
[7]禽流感病毒血凝素分子生物學研究進展[J]. 曹梅,田夫林,莊文忠.  動物醫(yī)學進展. 2004(02)

碩士論文
[1]全球背景下人源甲型流感病毒傳播行為分析[D]. 金夢哲.石家莊鐵道大學 2016
[2]禽流感病毒傳播過程研究[D]. 李素麗.石家莊鐵道大學 2016



本文編號：3190211