研究背景:近幾年來(lái),頻繁暴發(fā)的呼吸道傳染病疫情嚴(yán)重危害公眾健康。2005年暴發(fā)的H5N1禽流感,波及17個(gè)省市,造成13人死亡。2009年暴發(fā)自墨西哥的甲型H1N1流感疫情造成全球恐慌。2013年暴發(fā)于中國(guó)東部的H7N9禽流感疫情再次引起了全世界的關(guān)注。此外,近年來(lái)在我國(guó)流行的7型、14型和55型腺病毒已造成聚集性暴發(fā)疫情。呼吸道傳染病現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)技術(shù)的不足,嚴(yán)重影響疫情應(yīng)急處置的時(shí)效性和針對(duì)性。目的和意義:快速檢測(cè)呼吸道傳染病病原體是及時(shí)發(fā)現(xiàn)傳染源、采取有效隔離措施,防止疫情蔓延的關(guān)鍵,是呼吸道傳染病疫情科學(xué)防控的迫切需要。本研究擬建立基于微流控芯片和等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)的的呼吸道病原體現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)技術(shù),解決當(dāng)前呼吸道傳染病現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)技術(shù)缺乏,難以滿(mǎn)足呼吸道癥候群主要病原篩查的問(wèn)題;為及時(shí)準(zhǔn)確治療和隔離傳染源,實(shí)現(xiàn)疫情的及時(shí)有效科學(xué)防控提供技術(shù)支持。研究方法:首先,在GenBank中查找甲型H1、H3、H5、乙型流感病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒以及副流感病毒的保守序列,設(shè)計(jì)其特異性LAMP引物,根據(jù)擴(kuò)增效果篩選出最佳引物,建立并優(yōu)化常規(guī)熒光LAMP體系。其次,設(shè)計(jì)陣列化微流控芯片,研究等溫?cái)U(kuò)增用酶... 

【文章來(lái)源】：廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁(yè)數(shù)】：101 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
個(gè)人簡(jiǎn)歷
摘要
ABSTRACT
一、前言
    1 呼吸道傳染病概述
        1.1 流感病毒
        1.2 呼吸道合胞病毒
        1.3 副流感病毒
        1.4 腺病毒
    2 常規(guī)檢測(cè)方法
        2.1 病毒的分離培養(yǎng)鑒定
        2.2 免疫學(xué)檢測(cè)方法
        2.3 分子生物學(xué)檢測(cè)方法
    3 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)
        3.1 LAMP技術(shù)引物
        3.2 LAMP技術(shù)原理
        3.3 LAMP技術(shù)研究現(xiàn)狀
    4 微流控芯片技術(shù)
    5 主要研究?jī)?nèi)容與意義
二、常規(guī)等溫?cái)U(kuò)增熒光檢測(cè)技術(shù)的建立及評(píng)價(jià)
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 毒株及分離培養(yǎng)材料
        1.2 核酸提取、熒光定量PCR及LAMP擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)材料
        1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 病原體核酸的提取
        2.2 熒光定量PCR方法驗(yàn)證病毒
        2.3 相關(guān)病毒質(zhì)粒擴(kuò)大及提取實(shí)驗(yàn)
        2.4 LAMP引物設(shè)計(jì)及篩選
        2.5 熒光LAMP反應(yīng)體系優(yōu)化
        2.6 特異性評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)
        2.7 靈敏度評(píng)價(jià)
    3 結(jié)果與討論
        3.1 病原體熒光定量PCR檢測(cè)
        3.2 LAMP引物篩選
        3.3 LAMP反應(yīng)體系優(yōu)化
        3.4 特異性評(píng)價(jià)
        3.5 靈敏度評(píng)價(jià)
    4 小結(jié)
三、微流控等溫?cái)U(kuò)增熒光檢測(cè)技術(shù)建立及對(duì)呼吸道病毒的檢測(cè)效果評(píng)價(jià)
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 微流控?zé)晒釲AMP實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 微流控等溫?cái)U(kuò)增熒光檢測(cè)方法的建立及優(yōu)化
        2.2 微流控等溫?cái)U(kuò)增熒光檢測(cè)特異性評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)
        2.3 微流控等溫?cái)U(kuò)增熒光檢測(cè)靈敏度評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)
    3 結(jié)果與討論
        3.1 微流控等溫?cái)U(kuò)增熒光檢測(cè)方法體系優(yōu)化
        3.2 微流控等溫?cái)U(kuò)增熒光檢測(cè)方法的特異性
        3.3 微流控等溫?cái)U(kuò)增熒光檢測(cè)方法的靈敏度
        3.4 與熒光定量PCR方法靈敏度的對(duì)比結(jié)果
    4 小結(jié)
四、結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間取得的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]成都地區(qū)成人急性呼吸道感染病例中副流感病毒檢出情況分析[J]. 李興橋,劉雪薇,周濤,裴曉方.  四川大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2017(06)
[2]流感百年:20世紀(jì)流感大流行的回顧與啟示[J]. 曾祥興,李康生.  醫(yī)學(xué)與社會(huì). 2010(11)
[3]ELISA技術(shù)在禽流感診斷研究中的應(yīng)用[J]. 韓慶功,崔艷紅,張智勇.  生物技術(shù)通報(bào). 2008(06)
[4]小鼠抗兔IgG單克隆抗體的制備與應(yīng)用[J]. 張葵,汪濤,李琦,莊然,宋朝君,李永明,金伯泉.  標(biāo)記免疫分析與臨床. 2008(01)
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[6]LAMP法鑒定奶牛早期胚胎性別的效果研究[J]. 黃金明,熊杰,柳堯波,游偉.  家畜生態(tài)學(xué)報(bào). 2005(01)
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碩士論文
[1]全球背景下人源甲型流感病毒傳播行為分析[D]. 金夢(mèng)哲.石家莊鐵道大學(xué) 2016
[2]禽流感病毒傳播過(guò)程研究[D]. 李素麗.石家莊鐵道大學(xué) 2016



本文編號(hào)：3190211