背景與目的:神經(jīng)病理性痛是一種以神經(jīng)系統(tǒng)損傷或功能障礙為原發(fā)因素的疼痛,由于其機制不明致使臨床缺乏有效的鎮(zhèn)痛手段。通過轉(zhuǎn)錄組測序和蛋白質(zhì)譜分析發(fā)現(xiàn),線粒體解偶聯(lián)蛋白4（Uncoupling20protein4,UCP4）通過介導(dǎo)線粒體可塑性參與脊髓水平慢性痛調(diào)控。本實驗在神經(jīng)病理性痛模型（Spared20nerve20injury,SNI）小鼠上,綜合運用形態(tài)學(xué)、行為學(xué)以及線粒體功能檢測等方法,探討脊髓背角線粒體UCP4參與神經(jīng)病理性痛的過程,以期為臨床鎮(zhèn)痛提供新的策略。方法:1.利用免疫熒光組織化學(xué)染色方法,觀察小鼠腰段脊髓UCP4的表達分布情況,及其與星形膠質(zhì)細胞特異性標志物GFAP（Glial20fibrillary20acidic20protein,膠原纖維酸性蛋白）和小膠質(zhì)細胞特異性標志物Iba1（Ionized20calcium-binding20adapter20molecule201,離子鈣接頭蛋白抗原）的雙標情況。2.利用神經(jīng)病理性痛SNI小鼠模型建立、動物痛行為學(xué)檢測、轉(zhuǎn)錄組測序、Western-Blot、RT-q20PCR以及線粒體生物學(xué)功能檢測等方法,觀察SNI... 

【文章來源】：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
縮略語表
中文摘要
英文摘要
前言
文獻回顧
第一部分：UCP4在小鼠脊髓的表達分布情況
    1 材料
        1.1 實驗動物
        1.2 主要試劑
        1.3 主要液體的配制
        1.4 主要儀器
    2 方法
        2.1 小鼠灌注取材
        2.2 脊髓腰段冰凍切片的制備
        2.3 免疫熒光組織化學(xué)染色
        2.4 圖像采集和統(tǒng)計分析
    3 結(jié)果
        3.1 UCP4在脊髓的表達分布情況
        3.2 脊髓UCP4的表達細胞類型
    4 討論
第二部分：神經(jīng)病理性痛模型(SNI)小鼠脊髓背角UCP4的表達變化情況
    1 材料
        1.1 實驗動物
        1.2 主要試劑
        1.3 主要液體的配置
        1.4 主要儀器
    2 方法
        2.1 SNI模型制備
        2.2 痛的行為學(xué)檢測
        2.3 脊髓背角組織及線粒體蛋白提取
        2.4 神經(jīng)病理性痛模型(SNI)小鼠脊髓背角RNA序列文庫構(gòu)建和測序
        2.5 Western Blot檢測
        2.6 RT-qPCR檢測
        2.7 線粒體生物學(xué)功能檢測
        2.8 統(tǒng)計學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 轉(zhuǎn)錄組測序驗證神經(jīng)病理性痛模型(SNI)小鼠脊髓背角UCP4的變化
        3.2 神經(jīng)病理性痛模型(SNI)小鼠機械痛和熱痛的行為學(xué)變化
        3.3 神經(jīng)病理性痛模型(SNI)小鼠脊髓背角UCP4蛋白水平的表達變化
        3.4 神經(jīng)病理性痛模型(SNI)小鼠脊髓背角UCP4mRNA水平的表達變化
        3.5 神經(jīng)病理性痛模型(SNI)小鼠脊髓背角線粒體生物學(xué)功能檢測的變化
    4 討論
第三部分：脊髓水平靶向干預(yù)UCP4表達后對小鼠痛行為學(xué)的影響
    1 材料
        1.1 實驗動物
        1.2 主要藥物和試劑
        1.3 主要液體的配置
        1.4 主要儀器
    2 方法
        2.1 UCP4相關(guān)病毒的制備
        2.2 UCP4相關(guān)病毒脊髓背角淺層定位注射
        2.3 SNI模型制備
        2.4 UCP4病毒干預(yù)后小鼠痛行為學(xué)檢測
        2.5 Western Blot檢測
        2.6 RT-qPCR檢測
        2.7 線粒體生物學(xué)功能檢測
        2.8 統(tǒng)計學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 小鼠脊髓背角定位注射感染部位驗證
        3.2 UCP4病毒干預(yù)后小鼠脊髓背角UCP4mRNA水平的表達變化
        3.3 UCP4病毒干預(yù)后小鼠脊髓背角UCP4蛋白水平的表達變化
        3.4 UCP4病毒干預(yù)后小鼠脊髓背角線粒體生物學(xué)功能的變化
        3.5 UCP4OE病毒能夠上調(diào)神經(jīng)病理性痛(SNI)模型小鼠機械痛閾值,UCP4RNAi病毒能夠下調(diào)正常小鼠的機械痛閾值
    4 討論
小結(jié)
參考文獻
個人簡歷和研究成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]脊髓背角Ⅰ-Ⅲ層疼痛神經(jīng)環(huán)路的研究進展[J]. 王嘉琪,王圣明,嚴育東,孔牧,羅世城,楊靜,戴春秋,楊雁靈,王亞云.  神經(jīng)解剖學(xué)雜志. 2017(04)
[2]線粒體靶向藥物的研究進展[J]. 潘凌立,潘達,廖衛(wèi)兵,柯超,陳安清,郭清蓮.  醫(yī)學(xué)綜述. 2015(01)
[3]線粒體功能紊亂與慢性痛[J]. 鄭晨曦,涂濤,郭保霖,吳亦琳,羅世成,隋秉東,董蜀華,王亞云.  神經(jīng)解剖學(xué)雜志. 2014(01)
[4]線粒體解偶聯(lián)劑的研究進展[J]. 金甲,張鳳,楊玲玲,張杰鋒,湯杰,楊帆.  生命科學(xué). 2013(07)
[5]坐骨神經(jīng)選擇性損傷痛模型小鼠脊髓背角線粒體解偶連蛋白UCP4的表達變化[J]. 王雪瑩,郭保霖,劉磊,鄭晨曦,魏燕燕,隋秉東,李云慶,武勝昔,王亞云.  神經(jīng)解剖學(xué)雜志. 2012(03)
[6]慢病毒載體在RNA干擾中的應(yīng)用進展[J]. 梁艷,李濤,周克元.  國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志. 2010(11)



本文編號：3178082