發(fā)布時間：2021-04-13 23:13

　　目的:構(gòu)建、表達、鑒定和純化梅毒螺旋體（Treponema pallidum,Tp）鞭毛蛋白B（Fla B1,Fla B2,Fla B3）的不同肽段,用間接Ig G ELISA評估各肽段的血清學診斷應用價值,篩選出靈敏度高且特異性強的優(yōu)勢肽段。方法:從Gen Bank中獲取Tp的Fla B1、Fla B2和Fla B3的氨基酸序列,用BLAST分析Tp Fla B與其他病原體的鞭毛蛋白的同源性,將3種全長Fla B分為保守的N端、C端及中間可變區(qū)M肽段。設計9種Fla B肽段的特異性引物,以相應全長Fla B的重組質(zhì)粒為DNA模板,PCR擴增各肽段的基因片段,構(gòu)建p ET28a（+）原核表達載體,經(jīng)測序鑒定后轉(zhuǎn)化至E.coli BL21（DE3）中,IPTG誘導各重組肽段表達,Western Blot鑒定表達產(chǎn)物,Ni2+-NTA親和層析柱純化重組肽段,透析法復性,BCA法測定肽段濃度。建立基于重組Fla B肽段的ELISA,檢測各期梅毒患者血清、健康人血清和交叉血清中的特異性Ig G,并將其與TPPA進行比較,初步評價9種肽段的血清學診斷應用價值。結(jié)果:成功構(gòu)建9種Fla B肽段的重... 

【文章來源】：南華大學湖南省

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

種FlaB肽段的PCR擴增產(chǎn)物Fig.4.1PCRamplificationproductsofnineFlaBgenefragments

圖 4.1 9 種 FlaB 肽段的 PCR 擴增產(chǎn)物Fig. 4.1 PCR amplification products of nine FlaB gene fragments毒螺旋體 FlaB 肽段重組質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定種 FlaB 肽段的菌液 PCR 鑒定結(jié)果如下：

FlaB 肽段的誘導表達條件優(yōu)化 FlaB 肽段有無表達的鑒定aB 肽段重組質(zhì)粒且處于對數(shù)生長期的表達菌液加入 IPTG 同時設立未誘導組，37°C、220 rpm 誘導表達 6 h。SDS-PA誘導組相比，誘導組均有明顯表達。

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號：3136178