目的:構(gòu)建、表達(dá)、鑒定和純化梅毒螺旋體（Treponema pallidum,Tp）鞭毛蛋白B（Fla B1,Fla B2,Fla B3）的不同肽段,用間接Ig G ELISA評估各肽段的血清學(xué)診斷應(yīng)用價值,篩選出靈敏度高且特異性強的優(yōu)勢肽段。方法:從Gen Bank中獲取Tp的Fla B1、Fla B2和Fla B3的氨基酸序列,用BLAST分析Tp Fla B與其他病原體的鞭毛蛋白的同源性,將3種全長Fla B分為保守的N端、C端及中間可變區(qū)M肽段。設(shè)計9種Fla B肽段的特異性引物,以相應(yīng)全長Fla B的重組質(zhì)粒為DNA模板,PCR擴(kuò)增各肽段的基因片段,構(gòu)建p ET28a（+）原核表達(dá)載體,經(jīng)測序鑒定后轉(zhuǎn)化至E.coli BL21（DE3）中,IPTG誘導(dǎo)各重組肽段表達(dá),Western Blot鑒定表達(dá)產(chǎn)物,Ni2+-NTA親和層析柱純化重組肽段,透析法復(fù)性,BCA法測定肽段濃度。建立基于重組Fla B肽段的ELISA,檢測各期梅毒患者血清、健康人血清和交叉血清中的特異性Ig G,并將其與TPPA進(jìn)行比較,初步評價9種肽段的血清學(xué)診斷應(yīng)用價值。結(jié)果:成功構(gòu)建9種Fla B肽段的重... 

【文章來源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

種FlaB肽段的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物Fig.4.1PCRamplificationproductsofnineFlaBgenefragments

圖 4.1 9 種 FlaB 肽段的 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物Fig. 4.1 PCR amplification products of nine FlaB gene fragments毒螺旋體 FlaB 肽段重組質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定種 FlaB 肽段的菌液 PCR 鑒定結(jié)果如下：

FlaB 肽段的誘導(dǎo)表達(dá)條件優(yōu)化 FlaB 肽段有無表達(dá)的鑒定aB 肽段重組質(zhì)粒且處于對數(shù)生長期的表達(dá)菌液加入 IPTG 同時設(shè)立未誘導(dǎo)組，37°C、220 rpm 誘導(dǎo)表達(dá) 6 h。SDS-PA誘導(dǎo)組相比，誘導(dǎo)組均有明顯表達(dá)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]衛(wèi)計委公布2月全國法定傳染病疫情概況[J].   上海醫(yī)藥. 2017(05)
[2]2016年10月全國法定傳染病疫情概況[J].   內(nèi)科. 2016(06)
[3]2015年12月全國法定傳染病疫情概況[J].   內(nèi)科. 2016(01)
[4]梅毒特異性抗體試驗生物學(xué)假陽性分析[J]. 宋煥景,侯生根,陳建春,彭德志.  國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志. 2013(14)
[5]梅毒檢測技術(shù)進(jìn)展[J]. 左克.  北方藥學(xué). 2012(05)
[6]梅毒螺旋體外膜蛋白Tp0136的制備及在血清學(xué)診斷中的應(yīng)用[J]. 王磊陽,陳政卓,富夢楚,何君梅,李婷婷,沈琳,楊珺.  中國衛(wèi)生檢驗雜志. 2011(05)
[7]梅毒螺旋體Tp0821基因的克隆、表達(dá)、純化及免疫活性研究[J]. 伍寧,肖勇健,顧偉鳴,劉雙全,趙飛駿,張躍軍,吳移謀.  中華皮膚科雜志. 2010 (07)

博士論文
[1]梅毒螺旋體鞭毛蛋白免疫活性分析及其誘導(dǎo)HaCaT細(xì)胞表達(dá)基質(zhì)金屬蛋白酶的分子機制[D]. 蔣傳好.南華大學(xué) 2016



本文編號：3136178