[目的]甲型肝炎病毒（HAV）是一種具有高度傳染性的病原體,引起急性肝病。甲肝病毒感染后可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗甲型肝炎病毒的結(jié)構(gòu)蛋白和非結(jié)構(gòu)蛋白的抗體。然而,甲型肝炎病毒疫苗的接種導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生主要針對結(jié)構(gòu)蛋白（病毒衣殼）的抗體。而非結(jié)構(gòu)蛋白僅在活病毒活躍復(fù)制過程中大量產(chǎn)生,所以在疫苗接種的受試者中針對非結(jié)構(gòu)蛋白的抗體沒有或很少產(chǎn)生。目前,商業(yè)化免疫檢測試劑不能區(qū)分人體內(nèi)甲肝病毒抗體是來自天然感染或是疫苗免疫。在我們開展的甲型肝炎減毒活疫苗和滅活甲型肝炎疫苗的IV期臨床試驗(yàn)中,鑒別受試者體內(nèi)產(chǎn)生的甲肝抗體是來自疫苗免疫或是甲肝病毒天然感染是至關(guān)重要的。因此,基于非結(jié)構(gòu)蛋白抗體產(chǎn)生在兩種免疫形式中的差異,我們擬建立一種可以區(qū)分甲肝病毒天然感染與疫苗免疫的抗體ELISA檢測方法。[方法]在我們的研究中,我們將甲型肝炎病毒非結(jié)構(gòu)蛋白的免疫優(yōu)勢表位進(jìn)行設(shè)計(jì)、合成、連接并克隆到pGEX-5X-1質(zhì)粒。并將重組蛋白在大腸桿菌中表達(dá),并經(jīng)Ni2+磁珠純化。然后用純化的重組蛋白作為ELISA抗原,檢測血清中HAV非結(jié)構(gòu)蛋白的抗體。本研究構(gòu)建的ELISA一共檢測了來自疫苗Ⅳ其臨床研究的77份減毒活疫苗受試者血清... 

【文章來源】：昆明醫(yī)科大學(xué)云南省

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．病毒的基因組結(jié)構(gòu)以及結(jié)構(gòu)蛋白的蛋白酶水解過程ＯＲＥＳ：內(nèi)部核糖體進(jìn)位位點(diǎn)；ＵＴＲ??非編碼區(qū)）??

對子代病毒的重吸收和跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)至膽管被認(rèn)為是腸道分泌病毒的機(jī)制。??２．８病毒顆粒結(jié)構(gòu)??甲肝病毒是無包膜的二十立面體結(jié)構(gòu)顆粒，直徑約２７ｎｍ［６６］（圖２）。成熟的??病毒衣殼由１２個(gè)五聚體組成，每個(gè)五聚體由５個(gè)拷貝數(shù)的ＶＰ１，ＶＰ２和ＶＰ３組??成。與其他�。遥危敛《静煌郑校床⒉粫霈F(xiàn)在成熟的病毒顆粒中。迄今為止，??仍然無法產(chǎn)生高分辨率的甲型肝炎病毒顆粒的圖像。２００６年的一篇綜述［６７］（圖??３）展示了一個(gè)通過冷凍電鏡技術(shù)獲得的中等分辨率的圖像，顯示出在褶皺軸周??圍明顯凹陷的缺失，這是與其他小ＲＮＡ病毒不一樣的地方。然而，這些結(jié)果仍??然無法被證實(shí)或單獨(dú)公開發(fā)表。甲肝病毒具有非常有點(diǎn)的中和抗原位點(diǎn)。主要的??免疫優(yōu)勢位點(diǎn)是由ＶＰ１和ＶＰ３的殘基所組成，是形態(tài)依賴的［６８］。第二個(gè)位點(diǎn)??是血型糖蛋白Ａ結(jié)合位點(diǎn)，甲肝病毒可以利用它與紅細(xì)胞結(jié)合，造成紅細(xì)胞凝??聚。這個(gè)過程在酸性ｐＨ條件下是最優(yōu)的，而在生理ｐＨ條件下被抑制。表明甲??肝病毒不與紅細(xì)胞結(jié)合而避免被清除［６９

圖２．甲肝病毒電鏡照片?圖３．甲肝病毒中等分辨率冷凍電鏡照片??．甲型肝炎病毒流行病學(xué)??每年大約有１５０萬例甲型肝炎發(fā)生在全世界，但感染率可能高達(dá)十倍［７１］。??發(fā)病率與社會經(jīng)濟(jì)水平和安全飲用水密切相關(guān)：隨著收入的增加和清潔水飲用增加，甲型肝炎病毒感染的發(fā)生率降低。甲肝病毒的感染風(fēng)險(xiǎn)與衛(wèi)生條件、年相關(guān)的臨床表現(xiàn)以及終身免疫相關(guān)決定了全球范圍內(nèi)ＨＡＶ感染的不同模式。肝病毒的地方性流行水平是由人群血清陽性率的結(jié)果決定的，世界衛(wèi)生組（ＷＨＯ）最近發(fā)表了關(guān)于ＨＡＶ感染全球流行的系統(tǒng)性綜述［７２］。甲型肝炎在界范圍的流行性可以描述為高、中、低三種流行性。在衛(wèi)生條件和設(shè)備非常差欠發(fā)達(dá)國家，甲型肝炎病毒感染非常流行，大多數(shù)人在兒童時(shí)期感染。因?yàn)楦邪l(fā)生在早期，疾病往往是無癥狀的，在這些地區(qū)的發(fā)病的報(bào)告病率反而相對較低爆發(fā)并不常見。高流行地區(qū)包括非洲、亞洲和美國中部和南部，家庭擁擠、衛(wèi)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3109264