目的:評價基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜（MALDI-TOF MS）技術(shù)在臨床常見絲狀真菌鑒定中的應(yīng)用價值。方法:收集2017年4月到2019年2月湖南師范大學(xué)附屬一醫(yī)院（湖南省人民醫(yī)院）各種類型臨床標(biāo)本中分離培養(yǎng)的29株絲狀真菌,以及北京協(xié)和醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物實(shí)驗(yàn)室惠贈的26株絲狀真菌。對這55株絲狀真菌通過傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)鑒定、DNA測序及MALDI-TOF MS鑒定方法后,以DNA測序結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn),與另外2種方法的鑒定結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)比較,評價MALDI-TOF MS在臨床絲狀真菌鑒定上的應(yīng)用。結(jié)果:在28℃和35℃條件下培養(yǎng)的絲狀真菌,使用質(zhì)譜儀鑒定后,經(jīng)過χ²檢驗(yàn),得出P>0.05,提示培養(yǎng)溫度差異無統(tǒng)計學(xué)意義;以DNA測序結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn),傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)方法的正確鑒定率為69.1%（38/55）,而基于MALDI-TOF MS技術(shù)的正確鑒定率可達(dá)96.4%（53/55）;本研究中,使用“甲酸乙腈提取法”提取蛋白后,絲狀真菌質(zhì)譜鑒定的正確率為83.6%（46/55）,而“磁珠研磨法”提取蛋白后的質(zhì)譜鑒定率則為96.4%（53/55）。結(jié)論:臨床常規(guī)工作中使用質(zhì)譜儀鑒... 

【文章來源】：湖南師范大學(xué)湖南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

絲狀真菌菌落形態(tài)及鏡下形態(tài)圖

a 草酸青霉菌落形態(tài) b 草酸青霉鏡下形態(tài)（10×100）圖 1 絲狀真菌菌落形態(tài)及鏡下形態(tài)圖 DNA 測序.1 擴(kuò)增產(chǎn)物電泳55 株絲狀真菌 DNA 在 2 對引物下進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增，將其產(chǎn)物進(jìn)行電泳TS1-F/ITS2-R 擴(kuò)增產(chǎn)物條帶在 500-700bp，具體見圖 2；而β-微管蛋白產(chǎn)物條帶為 200-600 bp，具體見圖 3。

鏡下形態(tài)（10×100）圖 1 絲狀真菌菌落形態(tài)及鏡下形態(tài)圖3.3 DNA 測序3.3.1 擴(kuò)增產(chǎn)物電泳55 株絲狀真菌 DNA 在 2 對引物下進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增，將其產(chǎn)物進(jìn)行電泳，其中 ITS1-F/ITS2-R 擴(kuò)增產(chǎn)物條帶在 500-700bp，具體見圖 2；而β-微管蛋白(F/R)擴(kuò)增產(chǎn)物條帶為 200-600 bp，具體見圖 3。圖 2 絲狀真菌基因組 DNA 引物為 ITS1-F/ITS2-R 時 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖注：M:DNAmarker；引物為：ITS1-F/ITS2-R；1 煙曲霉；2 黑曲霉；3 黃/米曲霉；4 構(gòu)巢曲霉；5 土曲霉；6 雜色曲霉；7 溜曲霉；8 鐮刀菌；9 普通青霉；10 草酸青霉；11 陰性對照。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3105066