Armored RNA技術(shù)是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種主要用于制備RNA質(zhì)控品和標(biāo)準(zhǔn)品的技術(shù)。其原理是利用基因工程手段將載有大腸桿菌MS2噬菌體衣殼蛋白的基因序列和外源性基因序列克隆到表達(dá)載體中,然后將外源性基因片段轉(zhuǎn)錄成RNA,并包裹在MS2衣殼蛋白基因表達(dá)的衣殼蛋白中,最終裝配成球狀RNA-蛋白質(zhì)復(fù)合體,一般稱為“盔甲R(shí)NA”（armored RNA）,或MS2病毒樣顆粒（MS2 virus-like particle,MS2 VLP）。由于有外層衣殼蛋白的保護(hù),內(nèi)部的RNA片段能抵抗環(huán)境中存在的RNA酶的降解而保持穩(wěn)定;同時(shí),armored RNA整體結(jié)構(gòu)又很好模擬了病毒的天然屬性。所以,armored RNA技術(shù)在疾病診斷,尤其是在感染性疾病的診斷中具有很大的臨床應(yīng)用價(jià)值。我們前期的研究已經(jīng)使用armored RNA技術(shù)成功制備了流行性感冒、埃博拉以及中東呼吸綜合征等多種相關(guān)疾病病毒的armored RNAs,并在國(guó)內(nèi)成功開(kāi)展了這些項(xiàng)目核酸檢測(cè)的室間質(zhì)量評(píng)價(jià)（External quality assessment,EQA）。登革熱是由登革熱病毒引起、經(jīng)伊蚊傳播的一種急性傳染病。登革熱... 

【文章來(lái)源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１－１登革熱病毒基因組結(jié)構(gòu)示意圖??Ｆｉｇ．?１－１?Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?Ｄｅｎｇｕｅ?ｖｉｒｕｓ?ｇｅｎｏｍｅ??

（ＤＥＮＶ１？４），其基因組包括５’端非編碼區(qū)、核心蛋白（Ｃ）、前體膜蛋白（Ｍ）、??包膜蛋白（Ｅ）、非結(jié)構(gòu)蛋白（ＮＳ１，?ＮＳ２ａ，?ＮＳ２ｂ，ＮＳ３，?ＮＳ４ａ，?ＮＳ４ｂ?和?ＮＳ５）??［７］，登革熱病毒基因結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖１－１。??目前，熒光定量ＰＣＲ技術(shù)（ＲＴ－ｑＰＣＲ）廣泛用于登革熱病毒的檢測(cè)和基因分??型［１０，?１２－１４］。但是，在登革熱病毒核酸ＲＴ－ｑＰＣＲ檢測(cè)過(guò)程中，一些影響因素，??如核酸抽提方法、檢測(cè)方法、儀器類型以及操作人員等都可能引起檢測(cè)結(jié)果的變??異，造成不同實(shí)驗(yàn)室之間檢查結(jié)果缺乏可比性。另外，大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室使用的??ＲＴ－ｑＰＣＲ方法沒(méi)有經(jīng)過(guò)準(zhǔn)確度驗(yàn)證。據(jù)調(diào)查，僅１０％的實(shí)驗(yàn)室使用的ＲＴ－ｑＰＣＲ??方法性能良好，而超過(guò)８０％的實(shí)驗(yàn)室在登革熱病毒ＲＴ－ｑＰＣＲ核酸檢測(cè)過(guò)程中缺??乏靈敏度和特異性［１５］。值得注意的是，ＲＴ－ｑＰＣＲ技術(shù)是一種極為靈敏的檢查技??術(shù)，容易受到環(huán)境中交叉污染的影響，而出現(xiàn)假陽(yáng)性的結(jié)果；另外，登革熱病毒??是一種ＲＮＡ病毒

２．１．?ｐＡＣＹＣ－ＭＳ２－ＤＥＮＶ－ｌ￣４?重組質(zhì)粒的驗(yàn)證??２．１．１．?ＰＣＲ?驗(yàn)證??目的片段進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳后在凝膠成像儀上顯示的圖片（圖１－４）表明??ＤＥＮＶ－１？４目的片段均成功插入ｐＡＣＹＣ－ＭＳ２重組質(zhì)粒的ＭＣＳ２位點(diǎn)。??（ｂｐ）??２０００??■１０００??７５０??５００??２５０??。??圖１－４?ｐＡＣＹＣ－ＭＳ２－ＤＥＮＹ－ｌ？４目的片段ＰＣＲ驗(yàn)證示意圖??注：Ｍ：?２，ＯＯＯｂｐＭａｒｋｅｒ；?１：?ＤＥＮＶ－１；?２：?ＤＥＮＶ－２；?３：?ＤＥＮＶ－３；?４：?ＤＥＮＶ－４；??５：?ＧＡＰＤＨ?（４９６ｂｐ）〇??Ｆｉｇ．?１－４?Ｅｔｈｉｄｉｕｍ?ｂｒｏｍｉｄｅ－ｓｔａｉｎｅｄ?１％?ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｏｆ?ｔｈｅ?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?ｔａｒｇｅｔ??ｆｒａｇｍｅｎｔｓ．??Ｎｏｔｅ：?ｔｈｅ?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?ｐＡＣＹＣ－ＭＳ２－ＤＥＮＶ－ｌ￣４?ｆｒａｇｍｅｎｔｓ；?Ｍ：?２，０００?ｂｐ?Ｍａｒｋｅｒ；??１：?ＤＥＮＹ－１；?２：?ＤＥＮＶ－２；?３：?ＤＥＮＶ－３；?４：?ＤＥＮＶ－４；?５：?ＧＡＰＤＨ?（４９６ｂｐ）??２．１．２．測(cè)序驗(yàn)證??２．１．２．１．?ｐＡＣＹＣ－ＭＳ２－ＤＥＮＶ－ｌ?測(cè)序結(jié)果??■?上下游引物測(cè)序序列拼接結(jié)果與ＤＥＮＶ－１目的片段匹配??Ｓｅｑｕｅｎｃｅ?ＩＤ：?Ｑｕｅｒｙ＿１９６２０１Ｌｅｎｇｔｈ：?２８７２?Ｎｕｍｂｅｒ?ｏｆ?Ｍａｔｃｈｅｓ：?１??Ｓｃｏｒｅ?Ｅｘｐｅｃｔ?

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]實(shí)時(shí)定量RT-PCR技術(shù)測(cè)定初治白血病患者常見(jiàn)融合基因轉(zhuǎn)錄子水平及其標(biāo)準(zhǔn)化的探討[J]. 秦亞溱,李金蘭,主鴻鵠,李玲娣,常艷,郝樂(lè),阮國(guó)瑞,劉艷榮,黃曉軍,陳珊珊.  中華血液學(xué)雜志. 2007(07)



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