發(fā)布時(shí)間：2021-03-19 04:36

　　目的通過(guò)薄膜水化法,將脂質(zhì)體DPPC和DSPE制備成攜帶有生物素的納米級(jí)微泡。利用生物素——親和素系統(tǒng),對(duì)納米級(jí)微泡和IDH1-siRNA進(jìn)行連接,制備納米微泡-siRNA復(fù)合體。超聲輻照對(duì)納米微泡-siRNA進(jìn)行靶向破碎,分別從體內(nèi)及體外實(shí)驗(yàn),驗(yàn)證siRNA的轉(zhuǎn)染及干擾效率的提高,從而達(dá)到抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的效果,為腫瘤的基因及藥物治療載體選擇提供新思路。方法1.將脂質(zhì)體DPPC和DSPE-PEG（2000）-biotin溶于2ml氯仿。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后,加入1ml水合液,并于恒溫?fù)u床內(nèi)震蕩。500μl脂質(zhì)體水合液加入密封小管內(nèi)。將小管內(nèi)空氣置換為惰性氣體C₃F₈。銀汞調(diào)和器內(nèi)震蕩小管45s后,取出管內(nèi)懸液并用PBS稀釋至8ml。同時(shí)制備微泡作為對(duì)照。利用動(dòng)態(tài)光散射粒度/電位分析儀對(duì)制備的納米及微米氣泡進(jìn)行粒徑分析。掃描電鏡觀測(cè)NBs外觀。CCK-8檢測(cè)NBs細(xì)胞毒性。2.NBs-siRNA的制備及其檢測(cè):利用無(wú)RNA酶的PBS將100ul NBs懸液稀釋至850ul。加入100ul鏈霉親和素水溶液。小管旋轉(zhuǎn)器上震蕩小管30min。完成后,添加50... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：89 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

示意圖：超聲輻照下bubble的改變及其對(duì)細(xì)胞膜的影響

圖 2 NBs-siRNA 復(fù)合體示意圖，及其在腫瘤組織和正常組織的不同行為。在正常組織中，NBs-siRNA 復(fù)合體無(wú)法透過(guò)血管壁，而在腫瘤組織中，NBs-siRNA 復(fù)合體可以透過(guò)腫瘤血管壁，進(jìn)入腫瘤組織間隙。腫瘤靶向超聲輻照 NBs 能產(chǎn)生聲孔效應(yīng)，提高 siRNA 的轉(zhuǎn)染效率。

空軍軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文定 NBs 與 siRNA 的連接情況。結(jié)果（圖 4 D 和 E）顯示無(wú)論實(shí)驗(yàn)組（NBs-FAM-SC復(fù)合體）和對(duì)照組（單純 NBs）在光學(xué)顯微鏡下都可以觀測(cè)到 NBs，為中心透亮而邊緣粗黑的圓形或?yàn)楹谏↑c(diǎn)（較小的 NBs），根據(jù)標(biāo)尺可知 bubbles 的大小都在1000nm 以下。而熒光顯微鏡顯示實(shí)驗(yàn)組（NBs-FAM-SCR 復(fù)合體）可以觀測(cè)到綠色熒光，而且熒光位置、形態(tài)等與 NBs 基本符合，可以判斷熒光為 NBs 上所攜帶，而對(duì)照組（單純 NBs）沒(méi)有熒光的存在。同時(shí)，可以觀測(cè)到實(shí)驗(yàn)組（NBs-FAM-SCR 復(fù)合體）熒光圖像中有一些不規(guī)則熒光，而在光鏡下相同位置未觀測(cè)到 NBs（圖 4 紅色邊框標(biāo)注區(qū)域）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3089144