人星狀病毒（Human astrovirus,HAstV）、腸道腺病毒（Enteric adenovirus,EAdV）是引起急性胃腸炎的兩種常見病原體,目前尚未實現(xiàn)這兩種病原體熒光定量RT-PCR的單管雙重檢測。為建立一種靈敏特異的雙重熒光定量RT-PCR檢測方法并應用于實驗室樣本檢測,本研究選擇HAstV、EAdV特異性引物和探針,優(yōu)化反應體系和反應條件,并對該方法的靈敏性、特異性和穩(wěn)定性進行評價。結(jié)果顯示,該方法針對HAstV和EAdV的檢出限分別可以達到522拷貝/μL和53.5拷貝/μL;與多種常見和罕見的人腹瀉病毒沒有交叉反應;批內(nèi)和批間等重復性實驗變異系數(shù)均小于5%;靈敏度高于常規(guī)PCR。本研究提示,建立的HAstV、EAdV雙重熒光定量RT-PCR檢測方法具有較好的靈敏度、特異性和穩(wěn)定性,可用于實驗室HAstV和EAdV的快速篩查。 

【文章來源】：病毒學報. 2020,36(05)北大核心

【文章頁數(shù)】：10 頁

【文章目錄】：
材料與方法
    1標本來源
    2主要試劑和儀器
    3 Taq Man探針和雙向引物
    4常規(guī)PCR雙向引物
    5病毒核酸提取
    6質(zhì)粒標準品制備
    7 HAst VRNA標準品的制備
    8 EAd VDNA標準品的制備
    9雙重熒光定量RT-PCR反應體系的建立和優(yōu)化
    10敏感性實驗
    11特異性實驗
    12穩(wěn)定性實驗
    13方法學一致性評價
    14隨機盲樣評價
    15臨床應用
結(jié)果
    1熒光定量RT-PCR反應體系的建立和優(yōu)化
    2敏感性實驗
    3特異性實驗
    4穩(wěn)定性實驗
    5臨床樣本檢測方法學一致性評價
    6臨床樣本檢測隨機盲樣檢測
    7臨床應用
討論



本文編號：3033374