人星狀病毒（Human astrovirus,HAstV）、腸道腺病毒（Enteric adenovirus,EAdV）是引起急性胃腸炎的兩種常見病原體,目前尚未實(shí)現(xiàn)這兩種病原體熒光定量RT-PCR的單管雙重檢測(cè)。為建立一種靈敏特異的雙重?zé)晒舛縍T-PCR檢測(cè)方法并應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室樣本檢測(cè),本研究選擇HAstV、EAdV特異性引物和探針,優(yōu)化反應(yīng)體系和反應(yīng)條件,并對(duì)該方法的靈敏性、特異性和穩(wěn)定性進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果顯示,該方法針對(duì)HAstV和EAdV的檢出限分別可以達(dá)到522拷貝/μL和53.5拷貝/μL;與多種常見和罕見的人腹瀉病毒沒有交叉反應(yīng);批內(nèi)和批間等重復(fù)性實(shí)驗(yàn)變異系數(shù)均小于5%;靈敏度高于常規(guī)PCR。本研究提示,建立的HAstV、EAdV雙重?zé)晒舛縍T-PCR檢測(cè)方法具有較好的靈敏度、特異性和穩(wěn)定性,可用于實(shí)驗(yàn)室HAstV和EAdV的快速篩查。 

【文章來源】：病毒學(xué)報(bào). 2020,36(05)北大核心

【文章頁數(shù)】：10 頁

【文章目錄】：
材料與方法
    1標(biāo)本來源
    2主要試劑和儀器
    3 Taq Man探針和雙向引物
    4常規(guī)PCR雙向引物
    5病毒核酸提取
    6質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品制備
    7 HAst VRNA標(biāo)準(zhǔn)品的制備
    8 EAd VDNA標(biāo)準(zhǔn)品的制備
    9雙重?zé)晒舛縍T-PCR反應(yīng)體系的建立和優(yōu)化
    10敏感性實(shí)驗(yàn)
    11特異性實(shí)驗(yàn)
    12穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)
    13方法學(xué)一致性評(píng)價(jià)
    14隨機(jī)盲樣評(píng)價(jià)
    15臨床應(yīng)用
結(jié)果
    1熒光定量RT-PCR反應(yīng)體系的建立和優(yōu)化
    2敏感性實(shí)驗(yàn)
    3特異性實(shí)驗(yàn)
    4穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)
    5臨床樣本檢測(cè)方法學(xué)一致性評(píng)價(jià)
    6臨床樣本檢測(cè)隨機(jī)盲樣檢測(cè)
    7臨床應(yīng)用
討論



本文編號(hào)：3033374