目的構(gòu)建基于磁性分離和催化發(fā)夾組裝信號(hào)放大策略的外泌體雙膜蛋白共表達(dá)檢測(cè)平臺(tái)。研究方法1.外泌體純化及表征:以MDA-MB-231細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。細(xì)胞上清液經(jīng)超速離心機(jī)分離得到外泌體。透射電子顯微鏡（Transmission Electron Microscope,TEM）拍攝鑒定分析外泌體形態(tài)和大小;納米粒子跟蹤分析儀Nanoparticles Tracking Analysis,NTA)檢測(cè)外泌體粒徑和濃度;免疫印跡（Western Blot,WB）檢測(cè)外泌體蛋白表達(dá)情況;外泌體實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增試驗(yàn)。2.催化發(fā)夾組裝（Catalytic Hairpin Assembly,CHA）篩選:三組 CHA（CHA1、CHA2、CHA3）根據(jù)電泳結(jié)果和熒光檢測(cè)選擇最佳。3.基于磁性分離和催化發(fā)夾組裝的外泌體蛋白共表達(dá)檢測(cè)平臺(tái)可行性:以MDA-MB-231細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,①超分辨成像技術(shù)與免疫印跡實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證CD63在其外泌體膜上的表達(dá)。②多維高清流式細(xì)胞分析儀驗(yàn)證外泌體磁珠法富集及效率。③不同濃度外泌體與 AptEpCAM-T 催發(fā)鏈（Aptamer,Apt;Epithelial cell ... 

【文章來(lái)源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁(yè)數(shù)】：68 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１?（ａ）透射電子顯微鏡，（ｂ）?ＮＴＡ和（ｃ）免疫印跡實(shí)驗(yàn)分別表征乳腺癌ＭＤＡ－ＭＢ－２３１??細(xì)胞和其來(lái)源的外泌體??

各組分純度好，無(wú)多余條帶；催化發(fā)夾組裝（ＣＨＡ１）在催發(fā)鏈Ｔ的作用下可發(fā)??生無(wú)酶反應(yīng)且條帶明顯，但發(fā)夾結(jié)構(gòu)Ｈ１、發(fā)夾結(jié)構(gòu)Ｈ２在沒(méi)有催發(fā)鏈Ｔ時(shí)，兩者??也發(fā)生反應(yīng)且條帶明顯，說(shuō)明發(fā)夾結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定。電泳結(jié)果見(jiàn)圖２－２。??ｂｐ??５?〇?〇??蠢ｓ袋麗寒＾??圖２－２?ＣＩＩＡｌ電泳驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)??Ｆｉｇｕｒｅ?２－２?Ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ＣＨＡ１??催化發(fā)夾組裝（ＣＨＡ２）各組分純度好，無(wú)多余條帶；在催發(fā)鏈Ｔ的作用下??可發(fā)生無(wú)酶反應(yīng)且條帶明顯；發(fā)夾結(jié)構(gòu)Ｈ１、發(fā)夾結(jié)構(gòu)Ｈ２在沒(méi)有催發(fā)鏈Ｔ時(shí)，兩??者發(fā)生反應(yīng)不明顯（條帶不明顯），說(shuō)明發(fā)夾結(jié)構(gòu)較穩(wěn)定，自身發(fā)生反應(yīng)可以相??對(duì)消除。電泳結(jié)果見(jiàn)圖２－３。??ｂｐ??５００??馨＇■＊；．?著：…’＇賓ｉ?’?．??＃?＾?＾?＾?ｊ－＂??圖２－３?ＣＨＡ２電泳驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)??Ｆｉｇｕｒｅ?２－３?Ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ＣＨＡ２??４０??

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【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]血清外泌體miR-21在肺癌中的表達(dá)水平及其診斷效能[J]. 顏曉慧,安泰學(xué),覃思華,徐詠,黃依瑤,張涵.  實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志. 2017(16)
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碩士論文
[1]等溫循環(huán)放大檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性物質(zhì)[D]. 韓會(huì)霞.青島科技大學(xué) 2018
[2]利用催化發(fā)夾組裝的生物傳感器檢測(cè)目標(biāo)DNA和人源性α-凝血酶[D]. 白書(shū)連.重慶醫(yī)科大學(xué) 2017
[3]乳腺癌及大腸癌循環(huán)腫瘤細(xì)胞捕獲及鑒定方法的建立[D]. 戚麗娜.浙江大學(xué) 2017
[4]基于功能化DNA的信號(hào)放大與熒光檢測(cè)新方法研究[D]. 徐楠.南京大學(xué) 2015



本文編號(hào)：3019397