發(fā)布時間：2021-01-24 14:54

　　惡性腫瘤當前威脅著全世界人類的健康,人類的生活質(zhì)量也因此嚴重受到影響。近期許多研究發(fā)現(xiàn),LOX在一些惡性腫瘤中表達升高,認為LOX可能參與腫瘤發(fā)生發(fā)展、粘附性、惡性轉(zhuǎn)化和侵襲。LOX是一種存在于細胞中的銅依賴性氨基酸氧化酶,它作用于細胞外基質(zhì)膠原和彈性蛋白的賴氨酸殘基,并使其產(chǎn)生分子交聯(lián)。LOX也是一個乏氧反應(yīng)基因,在乏氧環(huán)境中乏氧誘導因子（HIF-1）可增強LOX m RNA和蛋白的活性,從而促進癌細胞侵襲和轉(zhuǎn)移。本研究采用實時熒光定量PCR法分別檢測2種結(jié)腸癌細胞株、肺癌細胞株、骨肉瘤和肝癌細胞株經(jīng)4 Gy的X射線照射后,在0 h、3 h、6 h、9 h、12 h、24h時間點LOX基因的表達水平。轉(zhuǎn)染p53 si RNA后,采用RT-PCR和Western Blot檢測輻射激活的HCT116 p53wt細胞株中LOX m RNA和蛋白表達;轉(zhuǎn)染p53質(zhì)粒到H1299細胞株后,檢測受照后LOX的蛋白表達水平。利用瞬時轉(zhuǎn)染的實驗方法將siLOX轉(zhuǎn)染進入腫瘤細胞,采用實時熒光定量PCR法和Western Blot法驗證轉(zhuǎn)染效率;采用克隆形成實驗,檢測LOX沉默聯(lián)合電離輻射的HCT116... 

【文章來源】：吉林大學吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

LOX的合成與分泌過程

第 3 章 實驗結(jié)果第 3 章 實驗結(jié)果3.1 輻射前后不同 p53 表型腫瘤細胞中 LOX 轉(zhuǎn)錄水平的變化利用實時熒光定量 PCR 法分別檢測 p53 野生型和 p53 缺失型的結(jié)腸癌細胞株、肺癌細胞株、骨肉瘤和肝癌細胞株經(jīng) 4 Gy 的 X 射線照射后，在 0 h、3 h、6h、9 h、12 h、24 h 時間點 LOX 的 mRNA 表達水平，見圖 3.1。結(jié)果顯示，在p53 野生型細胞(HCT116 p53wt、 H460、U2OS、HepG2)中，給予 X 射線處理后3 h、6 h、9 h、12 h、24 h，LOX 的合成量均顯著增加（p < 0.001），但 p53 缺失的細胞(HCT116 p53-/-、H1299、SAOS2、Hep3B)中 LOX mRNA 的表達則與照射前相比沒有明顯變化。同時我們選取對 X 射線較為敏感的結(jié)腸癌細胞 HCT116p53wt 進行了后續(xù)研究。

第 3 章 實驗結(jié)果2 p53 調(diào)控輻射誘導的 LOX 的轉(zhuǎn)錄和蛋白水平2.1 沉默 p53 抑制輻射誘導的 HCT116 p53wt 細胞中 LOX 的轉(zhuǎn)錄水平和蛋平為了初步確認 p53 對 LOX 基因的調(diào)控作用，采用 RT-PCR 和 Western 驗檢測受照的 HCT116 p53wt 細胞中 LOX 基因和蛋白合成量。結(jié)果如圖示（圖 A 為 LOX 轉(zhuǎn)錄水平，圖 B 為 LOX 蛋白電泳結(jié)果），HCT116 p53w中 LOX mRNA 和蛋白水平隨著輻照而增加，但轉(zhuǎn)染 p53 siRNA 的細胞中輻導的 LOX 轉(zhuǎn)錄和翻譯水平受到了明顯抑制，即沉默 p53 抑制了 HCT116 p5胞中電離輻射誘導的 LOX mRNA 和蛋白水平。


本文編號：2997439